透明質酸改性殼聚糖作靶向基因載體研究.pdf

1、基因治療為治愈遺傳疾病提供了一種有效手段，已成為近二十年來生物醫(yī)學研究領域的一個熱點?；蛑委煹囊粋€關鍵步驟是：開發(fā)安全而有效的基因載體。傳統(tǒng)上，基因載體可分為兩大類：病毒型基因載體和非病毒型基因載體。病毒型基因載體具有轉染效率高的優(yōu)勢，但由于安全性問題，如免疫原性和潛在的致癌性，使其臨床應用受到很大限制。正因為如此，非病毒型基因載體，特別是陽離子聚合物載體，受到越來越多的關注。其中，殼聚糖因其良好的生物相容性和生物可降解性，已成為一種

2、最具吸引力的潛在基因載體。 然而，有兩個缺陷限制了殼聚糖基因載體的應用范圍：一是殼聚糖水溶性差，二是殼聚糖基因載體轉染效率低。為了克服這些障礙，本論文將酶切后的透明質酸作為靶向配體，共價偶聯(lián)到不同分子量的殼聚糖的氨基上，以此構建靶向殼聚糖基因載體。親水性分子透明質酸的引入，使殼聚糖的水溶性明顯得到了改善。所合成的透明質酸修飾的殼聚糖，可通過靜電自組裝同質粒DNA形成核/殼結構的納米顆粒，其直徑均小于100I吼。經過載體的包覆，質

3、粒 DNA 具備良好的核酸酶抗性。MTT 實驗證明，載體對昆蟲細胞Sf9沒有任何細胞毒性。和未經修飾的殼聚糖相比，改性后的殼聚糖基因載體對昆蟲細胞Sf9的轉染效率大幅提高。以家蠶作為模式動物，測試載體的活體轉染效率，結果發(fā)現綠色熒光蛋白和紅色熒光蛋白基因均能有效表達，最高轉染效率超過50％。離體及活體轉染結果均說明透明質酸作為靶向配體，能有效提高基因的轉染效率。所得改性殼聚糖對其它細胞的毒性和轉染效率的研究正在進行之中。 此外，

4、本論文還研究了殼聚糖的分子量及載體/質粒的質量比對基因轉染效率的影響。離體及活體轉染實驗均表明，最適用于基因轉染的是載體2(ZT2)，載體2/質粒的最佳質量比為12/1。這些研究結果均表明，透明質酸修飾的殼聚糖，是一種很有潛力的基因載體。 最后，為探討基因轉染機理，本論文還用CdTe量子點對載體進行了標記，確定了載體與量子點相互作用的最佳配比為6×10<'-3>(載體溶液與量子點溶液的體積比)。這為進一步標記載體/基因復合物，進