人工分子伴侶-離子交換色譜法輔助還原變性蛋白質的復性.pdf

1、高效且廉價的蛋白質復性方法的研究一直是生物工程下游技術中的一個熱點。本文將離子交換色譜法(ion exchange chromatography，IEC)與人工分子伴侶法(artificial molecular chaperon，AMC)相結合，發(fā)展了人工分子伴侶-離子交換色譜法(AMC-IEC)，以脲變性/二硫蘇糖醇還原溶菌酶(lysozyme)為模型蛋白，研究該方法用于蛋白復性的效率，并將此方法應用于重組人粒細胞集落刺激因子(rh

2、C-CSF)的復性。 本論文包括以下幾個部分： 1.文獻綜述：對研究蛋白質復性的意義、蛋白復性方法及蛋白折疊液相色譜法、重組人粒細胞集落刺激因子分離純化等方面進行了綜述。共包括文獻97篇。 2.人工分子伴侶.離子交換色譜法復性還原變性溶菌酶：將IEC和AMC相結合，發(fā)展了AMC-IEC，并用于脲變性/二硫蘇糖醇還原溶菌酶的復性，對流動相中脲濃度、流動相中 -CD濃度、流動相pH、流動相流速、去垢劑與溶菌酶摩爾比、

3、去垢劑種類等進行了優(yōu)化。與AMC和IEC相比，在實驗考察的初始蛋白濃度范圍內，AMC-IEC所得的活性回收率更高，同時，該方法對初始濃度很高的還原變性溶菌酶能得到較高的活性回收率。當溶菌酶的初始濃度高達200 mg/mL時，其活性回收率仍能達到63％。另外，在AMC-IEC復性過程中，色譜柱的使用壽命比通常IEC方法更長。實驗結果表明這種方法是一種高效和廉價的蛋白復性方法。 3.一步人工分子伴侶-離子交換色譜法輔助還原變性溶菌酶

4、的復性；以月桂酰基肌氨酸鈉(Sodium Lauroyl Sarcosine，Sarkosyl，SLS)作為蛋白變性劑，發(fā)展了一步人工分子伴侶.離子交換色譜法，對還原變性溶菌酶進行了復性研究。對流動相中脲濃度，流動相中 -環(huán)糊精( -CD)濃度，流動相pH，流動相流速等復性條件進行了優(yōu)化。結果表明，當流動相中脲濃度為3.0 mol/L， -CD濃度為8 mmol/L，流動相pH為8.0并且流速為1 mL/min時，活性回收率最高。