人工分子伴侶體系輔助溶菌酶復(fù)性的研究.pdf

1、如何對(duì)包含體蛋白進(jìn)行正確的體外折疊,以期能夠獲得高濃度、高收率的活性蛋白產(chǎn)品是蛋白質(zhì)工業(yè)化應(yīng)用的瓶頸。為此本文對(duì)模型蛋白溶菌酶進(jìn)行了研究。首先考察了鹽酸胍、DTT、變性時(shí)間對(duì)變性過程中自由巰基數(shù)、殘余活力及稀釋復(fù)性率三個(gè)參數(shù)的影響。當(dāng)溶菌酶濃度為15mg/mL時(shí)得出變性條件是6M鹽酸胍,5mM DTT,在36℃及100 rpm搖床中60min能夠徹底還原變性,且復(fù)性效果最好。復(fù)性液中DTT的存在對(duì)復(fù)性效果沒有影響。接著研究了去污劑十六烷

2、基三甲基溴化銨(CTAB)和β-環(huán)糊精(β-CD)的人工分子伴侶體系對(duì)變性-還原溶菌酶的氧化復(fù)性效果。相繼考察了各種因素對(duì)復(fù)性率的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),溶菌酶最佳的復(fù)性操作條件為:pH值8.1,半胱氨酸作二硫鍵重排劑,濃度為1-2mM,CTAB與β-CD的最佳的復(fù)性濃度分別為0.6-1.2mM和30mg/1.5mL。此外復(fù)性率隨酶濃度的升高有所降低。最后,在β環(huán)糊精的基礎(chǔ)上合成了固態(tài)環(huán)糊精β-CDP,其大小在50-200μm之間,呈無色透明狀