外源線粒體對對乙酰氨基酚損傷的肝細胞的保護作用研究.pdf

1、對乙酰氨基酚（APAP）是一種廣泛使用的解熱鎮(zhèn)痛藥。治療劑量的APAP療效明確，用藥安全。但過量服用APAP可以引起嚴重的肝損傷，表現(xiàn)為肝細胞壞死。APAP引起肝細胞損傷的重要靶標是線粒體。APAP所致肝細胞毒性可能是通過干擾細胞線粒體的生物合成破壞線粒體結(jié)構(gòu)和功能，進而破壞肝細胞的功能。盡管乙酰半胱氨酸是臨床上治療 APAP中毒的標準藥物，但其給藥方式、劑量、時間仍存在爭議。因此，尋找減輕APAP肝毒性的途徑非常重要。本文中我們以構(gòu)建

2、了APAP致肝損傷的細胞模型，研究外源線粒體對APAP損傷的細胞的影響。
　　本研究構(gòu)建了線粒體可以表達綠色熒光蛋白的HepG2細胞，并從此細胞中提取綠色熒光線粒體，同時采用線粒體特異性的紅色熒光染料（MitoTracker Red CMXRos）對正常的HepG2細胞中提取的線粒體進行染色，獲得紅色熒光線粒體。將制備好的熒光線粒體與HepG2細胞共孵育后，實時觀察細胞攝取線粒體的情況，結(jié)果顯示細胞在10 min內(nèi)可以攝取外源線粒

3、體。然后用巨胞飲抑制劑—鹽酸阿米洛利、網(wǎng)格蛋白抑制劑—高滲蔗糖溶液預(yù)處理細胞30 min后，測定細胞對外源線粒體的攝取率，結(jié)果顯示當鹽酸阿米洛利預(yù)處理細胞后，攝取率顯著降低。此外，我們用詹姆斯綠 B對小鼠肝臟線粒體染色，并測定其直徑、膜通透性及腫脹度。激光粒度儀測定結(jié)果顯示，我們提取的線粒體的直徑主要分布在531.2?955.4 nm之間，線粒體腫脹度檢測結(jié)果顯示，線粒體溶液540 nm的吸光度較穩(wěn)定，線粒體的膜結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。最后，我們確定

4、APAP合適的作用濃度為10 mM、損傷時間為24 h，成功建立APAP致肝損傷的細胞模型，并初步探討小鼠肝臟線粒體對APAP損傷的細胞的保護作用。將細胞分為3組，分別為正常對照組、模型組和外源線粒體保護組。我們檢測了3組細胞的凋亡率、細胞培養(yǎng)液中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、細胞中谷胱甘肽（GSH）、三磷酸腺苷（ATP）的含量、線粒體形態(tài)和膜電位的變化。檢測結(jié)果顯示，與正常對照組相比，模型組細胞的凋亡率增加；細胞培養(yǎng)液中