基于新型分子信標(biāo)信號放大技術(shù)檢測腫瘤相關(guān)基因的研究.pdf

1、癌癥是嚴(yán)重危害人類健康和生命的重要疾病。其生長迅速、耗能大、易轉(zhuǎn)移，難以徹底治愈。治療癌癥的關(guān)鍵因素是在其早期階段對其進行精確的診斷并及時采取有效干預(yù)措施。癌癥是基因變異疾病，在早期階段準(zhǔn)確捕獲這些變異信息對癌癥的早期診斷具有重要的臨床價值，伴隨分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，使利用分子生物學(xué)方法早期檢測腫瘤變異基因成為可能。傳統(tǒng)的腫瘤核酸標(biāo)志物檢測方法存在靈敏性差、成本高、操作復(fù)雜、對病人造成創(chuàng)傷等缺陷，因此亟待開發(fā)出易于操作、成本低、高靈敏、

2、無創(chuàng)的早期腫瘤診斷技術(shù)。因核酸探針具有易于合成、易于修飾、生物兼容性好、具有高效的信號傳導(dǎo)機制等優(yōu)點，在腫瘤檢測及藥物靶向運輸領(lǐng)域引起了廣泛關(guān)注?；谝陨险撌?，本研究構(gòu)建了基于核酸探針的信號放大傳感系統(tǒng)用于檢測p53基因和miR-21等腫瘤相關(guān)基因。
　　第一章構(gòu)建了基于回文的多功能分子信標(biāo)信號放大系統(tǒng)用于檢測p53基因。由于傳統(tǒng)的基于酶的等溫擴增技術(shù)中，除了識別元件和目標(biāo)分子外，引物、模板、熒光報告基團也是必不可少，這樣既使檢測

3、繁瑣也增加了檢測成本。為了解決這個問題，并受到回文結(jié)構(gòu)啟發(fā)，我們首次將回文序列引入分子信標(biāo)3’端構(gòu)建了一種基于回文的熒光修飾的多功能分子信標(biāo)（簡稱 P-MB），使得一個核酸探針同時具有識別元件、引物、模板、報告基團等多種功能。我們的檢測體系在即使只有微量目標(biāo)存在時只需要一個核酸探針就可以實現(xiàn)熒光信號累積放大，從而檢測出低濃度的目標(biāo)分子。實驗結(jié)果證明我們的檢測系統(tǒng)具有較高的靈敏性和特異性，并能檢測實際樣本中 p53基因；此外，研究證明我們

4、的檢測系統(tǒng)可以同時、較好地檢測多個目標(biāo)分子。因此，該技術(shù)在核酸或其他分子檢測方面具有很好的應(yīng)用前景。
　　第二章構(gòu)建了基于環(huán)輔助的的新型分子信標(biāo)檢測miR-21的傳感系統(tǒng)。本研究中，我們設(shè)計的新型分子信標(biāo)在人工合成的環(huán)狀DNA探針輔助下具備識別目標(biāo)、引物、模板及熒光報告多種功能。該系統(tǒng)中每個環(huán)（簡稱Cir）可以與三個分子信標(biāo)（MB）結(jié)合形成Cir/3MB。無目標(biāo)存在時，分子信標(biāo)發(fā)夾牢牢鎖住，一方面使熒光基團Cy3熒光猝滅，另一方面