基于新型信號(hào)檢測(cè)技術(shù)的蛋白激酶活性分析方法研究.pdf

1、蛋白激酶在細(xì)胞的增殖、分化、代謝、凋亡等生理過(guò)程的調(diào)控中起著十分重要的作用。其活性的異常會(huì)導(dǎo)致許多疾病的產(chǎn)生，因此對(duì)蛋白激酶活性的分析與研究對(duì)于臨床診斷以及靶向藥物的研制都具有重要的意義。相關(guān)領(lǐng)域的研究迫切需要開(kāi)發(fā)靈敏度高、特異性好、操作簡(jiǎn)單、成本低廉的檢測(cè)蛋白激酶活性的新方法。本論文以蛋白激酶 A（PKA）為研究對(duì)象，采用Zr4+修飾的功能化磁性微球?yàn)榱姿峄嚯淖R(shí)別載體，創(chuàng)新性利用上轉(zhuǎn)換熒光以及便攜式血糖儀等新型信號(hào)檢測(cè)機(jī)制，建立了靈

2、敏檢測(cè)蛋白激酶活性的方法。主要研究?jī)?nèi)容如下：
　　1.將Zr4+修飾在Fe3O4/SiO2磁性微球表面。生物素（Biotin）標(biāo)記的底物多肽在蛋白激酶存在時(shí)特定的氨基酸殘基將被磷酸化，多肽上的磷酸基團(tuán)與Zr4+特異性結(jié)合，而被富集在磁性微球表面；同時(shí)多肽一端標(biāo)記的 biotin與表面標(biāo)記有親和素（Avidin）的上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米粒子特異性結(jié)合。因此，蛋白激酶的活性與磁性微球上富集的上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米粒子呈正比關(guān)系。通過(guò)對(duì)磁性微球表面的磷

3、酸化多肽進(jìn)行洗脫并檢測(cè)溶液中的上轉(zhuǎn)換熒光強(qiáng)度，即可實(shí)現(xiàn)蛋白激酶活性的高靈敏度檢測(cè)。該方法對(duì)蛋白激酶活性檢測(cè)范圍為0.05 mU/μL到0.2 U/μL；檢出限為0.02 mU/μL。
　　2.基于常用的便攜式血糖儀，建立了一種簡(jiǎn)單、快速測(cè)定蛋白激酶活性的方法。同樣以 Zr4+修飾的磁性微球?yàn)榱姿峄嚯母患d體，在其表面富集蛋白激酶催化產(chǎn)生的biotin-磷酸化多肽，經(jīng)由鏈霉親和素（Streptavidin）介導(dǎo)而進(jìn)一步捕獲 bio