量子點(diǎn)熒光信號(hào)放大及其用于豬偽狂犬病的診斷.pdf

1、豬偽狂犬病是當(dāng)前危害全球養(yǎng)殖業(yè)的主要疾病之一，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前，在我國等一些發(fā)展中國家和地區(qū)，該病仍頻繁發(fā)生，因此發(fā)展快速高靈敏的檢測(cè)方法，對(duì)于豬偽狂犬病的早期診斷以及病情控制都具有重要的意義。采用量子點(diǎn)的信號(hào)放大免疫分析具有靈敏度高、檢測(cè)范圍廣、特異性好、檢測(cè)手段多樣性等優(yōu)勢(shì)，在環(huán)境檢測(cè)、生物分析、臨床診斷等方面得到了廣泛的應(yīng)用。本文針對(duì)基于CdSe量子點(diǎn)的熒光信號(hào)放大進(jìn)行了研究并將其用于豬偽狂犬病的檢測(cè)。論文圍繞C

2、dSe量子點(diǎn)探針以及CdSe功能化SiO2微球探針的制備，結(jié)合量子點(diǎn)信號(hào)放大技術(shù)與豬偽狂犬病病毒(PRV)抗體免疫分析新方法的建立，開展了以下三個(gè)方面的工作：
　　 ⑴采用熒光染料羅丹明5N(Rhod-5N)檢測(cè)CdSe量子點(diǎn)，闡述了該方法在生物分析及免疫檢測(cè)中的應(yīng)用前景以及其相比于傳統(tǒng)檢測(cè)手段的優(yōu)勢(shì)。實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了Rhod-5N檢測(cè)CdSe量子點(diǎn)的條件，得出在最佳條件下，對(duì)CdSe量子點(diǎn)檢測(cè)的線性范圍為10.0到500 pmol/

3、L，檢測(cè)的線性方程Y=0.1538+0.00134X，線性相關(guān)系數(shù)R2為0.9943，最低檢測(cè)限為10.0 pmol/L。采用該方法所檢測(cè)的熒光信號(hào)強(qiáng)度為直接合成的油相CdSe量子點(diǎn)的45倍，為轉(zhuǎn)水相之后的CdSe量子點(diǎn)的370倍。該方法對(duì)量子點(diǎn)本身的光學(xué)以及其它性能要求不高，因此目前的量子點(diǎn)合成技術(shù)完全可以滿足需求。該方法為生物分析中量子點(diǎn)等標(biāo)記物的檢測(cè)提供了一種新的快速靈敏的檢測(cè)途徑，同時(shí)該方法還可以推廣到對(duì)其它納米材料標(biāo)記物的檢測(cè)

4、。
　　 ⑵采用基于CdSe量子點(diǎn)離子置換反應(yīng)的信號(hào)放大方法實(shí)現(xiàn)了對(duì)PRV抗體的靈敏檢測(cè)。該方法利用CdSe量子點(diǎn)中含有的大量Cd2+進(jìn)行免疫反應(yīng)之后信號(hào)的放大。免疫反應(yīng)之后通過Ag+置換出標(biāo)記物CdSe中的Cd2+，最后采用Cd2+熒光指示劑Rhod-5N對(duì)釋放出來的Cd2+進(jìn)行檢測(cè)從而間接的檢測(cè)PRV抗體的含量。結(jié)果表明，在最優(yōu)化的條件下，該方法對(duì)PRV抗體的檢測(cè)可達(dá)陽性血清稀釋1024倍，對(duì)PRV抗體的檢測(cè)限約為1.22

5、ng/mL。和傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)相比，該方法成本較低，檢測(cè)線性范圍較寬，靈敏度更高，特異性好，在臨床分析和控制疾病傳播方面顯示出了良好的應(yīng)用前景。
　　 ⑶合成了穩(wěn)定的SiO2@QDs@SiO2微球并和兔抗豬IgG偶聯(lián)制備探針，并將該探針用于PRV抗體的檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)采用St(S)ber方法合成尺寸分布均勻的二氧化硅微球，對(duì)其表面巰基化后直接修飾油相CdSe量子點(diǎn)，將修飾之后的硅球進(jìn)一步硅烷化，并進(jìn)行環(huán)氧基修飾，合成