微生態(tài)硒的制備及遺傳毒性的研究.pdf

1、硒具有抗氧化、提高機(jī)體免疫水平、緩解重金屬毒性、抗衰老、防癌抗腫瘤、抗心腦血管疾病等對(duì)人體及動(dòng)物重要的生理功能。但我國(guó)卻缺硒現(xiàn)象嚴(yán)重,這已經(jīng)引起了人們的普遍認(rèn)識(shí)和重視。硒添加劑的研究已成為國(guó)內(nèi)外研究的熱門課題,目前市場(chǎng)上的硒添加劑有無(wú)機(jī)硒如亞硒酸鈉和有機(jī)硒如硒代蛋氨酸兩大類,但是在一定程度上這些補(bǔ)硒劑都有副作用,且轉(zhuǎn)化率低。在人們?cè)絹?lái)越注重自身健康的今天,人們更期待安全高效的補(bǔ)硒劑。而微生態(tài)硒是通過(guò)微生物合成代謝作用,合成硒蛋白、硒氨基

2、酸、硒多糖等生物大分子,經(jīng)過(guò)超聲破碎透析后獲得這些生物大分子的混合物,這些有機(jī)化合物安全性高,更易被人體吸收轉(zhuǎn)化和利用。它的研究及商業(yè)化生產(chǎn)必定是人們健康補(bǔ)硒的福音。
　　實(shí)驗(yàn)通過(guò)梯度平板和搖瓶發(fā)酵培養(yǎng),從白地霉(Geotrichum candidum)、粘紅酵母(Rhodotorula glutinis)、假絲酵母(Candida Albicans)、釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)D254四株菌株中

3、得到釀酒酵母D254是合成微生態(tài)硒能力最強(qiáng)的菌株。測(cè)定不同硒濃度下,釀酒酵母D254的生物量與硒含量,初步確定在液體培養(yǎng)中硒濃度為70 mg/L-90 mg/L為最適合生產(chǎn)高硒釀酒酵母的濃度范圍。
　　培養(yǎng)基中添加不同濃度的硒,搖瓶發(fā)酵釀酒酵母 D254,用紫外分光光度法測(cè)定菌體超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶和過(guò)氧化氫酶三種抗氧化酶的活性。研究不同硒濃度對(duì)釀酒酵母抗氧化酶活力的影響。結(jié)果表明,隨著硒濃度的升高三種抗氧化酶活性均

4、先升高后降低,且都在硒濃度為90 mg/L時(shí),酶活力達(dá)到最大。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明不同硒濃度對(duì)抗氧化酶活力影響不同,且在一定范圍內(nèi)硒濃度的升高可以提高菌體抗氧化酶的活力。
　　采用響應(yīng)面試驗(yàn)方法,選擇硒添加量、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間、初始 pH、接種量、裝液量六個(gè)因素進(jìn)行進(jìn)行 Plackett-Burman試驗(yàn),研究影響微生態(tài)硒合成的主要因素;采用單因素試驗(yàn)和最陡爬坡試驗(yàn)確定各主要因素水平;采用三因素三水平的Box-Behnken試驗(yàn),以微生

5、態(tài)硒為響應(yīng)值,研究釀酒酵母 D254合成微生態(tài)硒的發(fā)酵條件。結(jié)果表明:硒添加量、初始 pH、培養(yǎng)溫度是影響微生態(tài)硒合成的主要因素;硒添加濃度與培養(yǎng)溫度的交互作用顯著,硒添加濃度與初始 pH、培養(yǎng)溫度與初始pH的交互作用不顯著;使用響應(yīng)優(yōu)化器分析獲得微生態(tài)硒的最佳培養(yǎng)條件為硒添加量81.3 mg/L、初始 pH6.3、培養(yǎng)溫度28.6℃,其預(yù)測(cè)微生態(tài)硒含量為1550.994μg/L,實(shí)測(cè)微生態(tài)硒含量為1544.165μg/L,兩者基本相符

6、。
　　微生態(tài)硒與硒代蛋氨酸遺傳毒理的比較實(shí)驗(yàn)。選用 TA97、TA98、TA100、TA102四種菌株進(jìn)行微生態(tài)硒和硒代蛋氨酸的Ames試驗(yàn)。各設(shè)三個(gè)梯度0.015 mg/mL、0.03 mg/mL、0.06 mg/mL的實(shí)驗(yàn)組,一個(gè)陰性對(duì)照組和一個(gè)陽(yáng)性對(duì)照組。分別進(jìn)行雌雄小鼠骨髓微核試驗(yàn)和雄性小鼠精子畸變?cè)囼?yàn)。Ames試驗(yàn)結(jié)果表明,微生態(tài)硒和硒代蛋氨酸對(duì) TA97、TA98、TA100、TA102四種菌株均無(wú)致突變活性,說(shuō)明在