原油及0#柴油對海洋微藻的急性毒性及遺傳毒性研究.pdf

1、隨著海上原油開采量及其海上運輸量的不斷增加，海上油溢事件時有發(fā)生，對海洋環(huán)境的影響不斷加劇，因此原油類污染物的毒性檢測顯得尤為重要。海洋微藻為海洋生物鏈的最底層，對毒性物質(zhì)較為敏感。本文優(yōu)選赤潮異彎藻(Heterosigma akashiwo)作為模式生物，利用熒光技術(shù)和單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)分別檢測了原油類污染物的急性毒性和遺傳毒性，建立了基于赤潮異彎藻的油品急性毒性和遺傳毒性檢測方法，并評價了兩種原油及0＃柴油的急性毒性和0＃柴油的遺傳

2、毒性。主要工作成果如下：
　　 1.篩選出對原油類污染物敏感的赤潮異彎藻作為急性毒性評價的模式生物。首先，制備了兩種原油及0＃柴油的水中分散性成分WAF(1:50)，并利用GC-MS測定了其主要組成；其次，考察了海洋微藻中肋骨條藻(Skeletonemacostatum)、纖細(xì)角毛藻((Chaetoceros gracilis)、赤潮異彎藻對原油及0＃柴油WAF(1:50)的敏感性，采用熒光技術(shù)檢測微藻在680nm左右的葉綠素a

3、熒光峰強度，以未加毒物的微藻葉綠素a熒光峰強為參比，計算微藻的相對抑制率，得出不同作用時間的EC50，并以96h-EC50作為衡量油品急性毒性的指標(biāo)。微藻敏感性順序為赤潮異彎藻>中肋骨條藻>纖細(xì)角毛藻。
　　 2.建立了以赤潮異彎藻作為受試生物的遺傳毒性實驗方法，該方法的實驗基礎(chǔ)基于改良后的單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)。首先，以標(biāo)準(zhǔn)毒性物質(zhì)H2O2作為毒性物質(zhì)，對五種海洋微藻的單細(xì)胞凝膠電泳實驗的可行性進(jìn)行篩選，只有赤潮異彎藻適用于單細(xì)胞

4、凝膠實驗；其次，通過條件實驗對傳統(tǒng)的單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)進(jìn)行了改良，省略了傳統(tǒng)單細(xì)胞凝膠電泳的細(xì)胞裂解步驟，膠板在堿性緩沖液中解旋20 min后以23 V、200 mA條件電泳20 min即可完成，改進(jìn)后的實驗技術(shù)更適用于赤潮異彎藻；然后，采用DNA尾長(Tail length)、尾矩(Tail moment)、Olive尾矩(Olive tail moment)三種主要評價指標(biāo)對赤潮異彎藻DNA損傷進(jìn)行了比較分析。
　　 3.以

5、赤潮異彎藻為模式生物，利用熒光技術(shù)和改良后的單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)，評價了0＃柴油的水中分散性成分(WAF：V：V=1:9)的急性毒性及遺傳毒性。首先，制備了0＃柴油的WAF(1:9)，利用GC-MS分析了其烷烴的量為14.95 mg/L和多環(huán)芳烴的量為1.20 mg/L，二者之和為16.15mg/L。紫外分析顯示0＃柴油的WAF隨時間延長芳烴組分的自身揮發(fā)量較小。其次，利用熒光技術(shù)評價了0＃柴油WAF(1:9)的急性毒性，在5％(0.81

6、 mg/L)就已表現(xiàn)出明顯的抑制作用，隨著濃度的增加抑制率增強。利用改良后的單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)評價了0＃柴油WAF(1:9)的遺傳毒性，在以尾鉅(Tail moment)作為衡量DNA損傷程度的指標(biāo)時，染毒12h的5％濃度組與對照組相比較DNA損傷已有顯著性差異(P<0.01)，隨著濃度的增加損傷越嚴(yán)重；染毒24 h時，5％濃度組與空白組相比較DNA損傷無顯著性差異，10％(1.62 mg/L)和20％(3.24mg/L)濃度下仍有顯著