高速逆流色譜分離純化吳茱萸、虎杖等中藥有效成分的研究.pdf

1、高速逆流色譜(high-speedcounter-currentchromatography，簡稱HSCCC)是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來的一種液液分配色譜技術(shù)，與其它色譜技術(shù)不同的是它不需要任何固態(tài)載體，因而避免了分離樣品與固態(tài)載體表面因發(fā)生化學(xué)反應(yīng)而造成的失活、變性、污染及不可逆吸附等不良情況，它還具有高效、快速、上樣量大、回收率高等優(yōu)點，所以特別適合于天然產(chǎn)物的分離與純化。經(jīng)過近30年的發(fā)展，隨著其理論與技術(shù)的日益發(fā)展與完善，HSC

2、CC已在生物、醫(yī)藥、食品、材料、農(nóng)業(yè)、環(huán)保等領(lǐng)域獲得了廣泛的應(yīng)用，尤其是在中藥有效成分的分離純化領(lǐng)域已成為最有優(yōu)勢的分離分析方法之一。 擁有兩千多年悠久歷史的傳統(tǒng)中藥為中華民族的生存繁衍做出了不可磨滅的貢獻。在當(dāng)今世界“回歸自然”思潮的影響下，中藥正以其豐富的資源、獨特的療效、毒副作用小等優(yōu)點越來越受到世人的青睞。傳統(tǒng)中藥與西藥相比最大缺點是產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定、質(zhì)量得不到保證、質(zhì)量控制缺乏量化的標(biāo)準(zhǔn)、說服力不強，這也是中藥現(xiàn)代化之路

3、的最大障礙。因此采用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)手段研究中藥、闡明其產(chǎn)生療效的物質(zhì)基礎(chǔ)、健全中藥材及其制劑標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范體系已成為中藥研究中刻不容緩的任務(wù)。 目前，中藥活性成分分離純化方法主要有制備型高效液相色譜(highperformanceliquidchromatography,HPLC)、柱層析及HSCCC等。將HSCCC應(yīng)用于中藥研究可以實現(xiàn)：(1)高純度藥用成分對照品的制備；(2)配合活性跟蹤入藥部位的設(shè)計逐級分離制備活性成分；(3)為中

4、藥材和中藥方劑指紋圖譜的建立提供更豐富或準(zhǔn)確的信息和數(shù)據(jù)；(4)進行中試批量生產(chǎn)和工業(yè)生產(chǎn)。 本文應(yīng)用HSCCC，采用優(yōu)化的實驗條件對常用中藥吳茱萸、虎杖、五味子、卷柏中的有效成分進行了分離純化，經(jīng)HSCCC分離所得化合物的純度由HPLC檢測均大于95％，化學(xué)結(jié)構(gòu)經(jīng)核磁共振氫譜(1H-NMR)與碳譜(13C-NMR)得到了鑒定。為上述中藥的藥理研究與開發(fā)、中藥及其制劑的鑒別及質(zhì)量控制提供了參考。 一、HSCCC分離純化吳

5、茱萸生物堿類成分的研究 建立了HSCCC分離純化吳茱萸中生物堿類化合物的方法。使用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(5:5:7:5，v/v)的上相為固定相，下相為流動相；流速：2.0mlmin-1；轉(zhuǎn)速：900rpm；檢測波長為254nm；從180mg吳茱萸粗提物中一步分離得到吳茱萸堿28mg、吳茱萸次堿19mg、吳茱萸新堿21mg、1-methy-2-[(6Z、9Z)]-6，9-pentadecadienyl-4-(1H)-quin

6、olone16mg、1-methyl-2-dodecyl-4-(1H)-quinolone12mg；純度分別為98.7％，98.4％，96.9％，98.0％，97.2％。上述化合物結(jié)構(gòu)經(jīng)1H-NMR與13C-NMR得到了鑒定。 二、HSCCC分離純化虎杖有效成分的研究 建立了HSCCC分離純化虎杖中五種有效成分的方法?；⒄却痔嵛锝?jīng)兩相溶劑體系石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(2∶5∶4∶6，v/v)的上、下相分配，上相得到樣品

7、1，下相得到樣品2。使用石油醚-乙酸乙酯-水(1∶5∶5，v/v)的上相為固定相，下相為流動相；流速：1.5mlmin-1；轉(zhuǎn)速：700rpm；波長：254nm；從200mg樣品1中分離出19.3mg白藜蘆醇苷和17.6mg大黃素-8-O-β-D-葡萄吡喃糖甙，純度分別為97.5％和97.1％。使用石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(3∶5∶4∶6，v/v)的上相為固定相，石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(3∶5∶4∶6，v/v)和石油醚-乙酸乙酯-

8、甲醇-水(3∶5∶7∶3，v/v)的下相為流動相實現(xiàn)梯度洗脫；流速：1.5mlmin-1；轉(zhuǎn)速：700rpm；波長：254nm；從220mg樣品2中分離出18.5mg白黎蘆醇，35.3mg大黃素，8.2mg大黃素甲醚，經(jīng)HPLC分析，其純度分別為98.7％，99.3％，98.5％。上述化合物結(jié)構(gòu)經(jīng)1H-NMR與13C-NMR得到了鑒定。 三、HSCCC分離純化五味子木質(zhì)素類成分的研究 建立了HSCCC分離純化五味子中木質(zhì)

9、素類成分的新方法。使用石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(5∶5∶6∶4，v/v)的上相為固定相，下相為流動相；流速：2.0mlmin-1；轉(zhuǎn)速：900rpm；波長：254nm；從200mg五味子粗提物中分離得到了五味子素12mg、五味子乙素9mg，經(jīng)HPLC測定純度分別為95.1％、96.9％。上述化合物經(jīng)與對照品的光譜數(shù)據(jù)對照得到了鑒定。 四、HSCCC分離純化卷柏雙黃酮類成分的研究 建立了HSCCC分離純化了傳統(tǒng)卷柏中的雙