運(yùn)用高速逆流色譜分離蘆薈中活性成分的研究.pdf

1、高速逆流色譜(High-speed Countercurrent Chromatography,簡(jiǎn)稱HSCCC)，是上世紀(jì)80年代發(fā)展的一種新型的液-液分配技術(shù)。高速逆流色譜技術(shù)應(yīng)用范圍很廣泛，由于其有足夠多的兩相溶劑體系可以選擇，所以幾乎可以應(yīng)用到各級(jí)各類天然活性成分領(lǐng)域。同時(shí)，其洗脫方式也靈活多樣，既可以是單一流動(dòng)相，也可以是多種流動(dòng)相。樣品既可以是初提物，也可以是經(jīng)過(guò)初步純化的樣品。進(jìn)樣量可以是幾毫克，也可以是幾克。
　　

2、 蘆薈有著很多重要醫(yī)用藥用價(jià)值，但其化學(xué)成分相當(dāng)?shù)膹?fù)雜。目前，人們得出的蘆薈的藥理生理活性都是針對(duì)多種組分共同作用而言的，然而起主要作用的只是其中的一類。要研究是哪一種活性物質(zhì)的在起作用就必須對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行純化。蘆薈苷是蘆薈中的最為重要的生物活性成分之一，他們是醫(yī)藥及化妝品的天然原料，有著極其重要的研究利用價(jià)值。
　　 本文就是以此為目的，旨在建立運(yùn)用高速逆流色譜從庫(kù)拉索蘆薈中分離純化蘆薈苷的方法，并研究其在化妝品中的應(yīng)用。

3、>　　 首先，運(yùn)用選定的工藝條件：乙醇超聲提取法，通過(guò)酸化、浸提、大孔吸附樹(shù)脂吸附洗脫、冷凍干燥等流程，從蘆薈皮中提取蘆薈苷。蘆薈苷純度分別為蘆薈苷A，22.7％和蘆薈苷B，14.8％。
　　 然后，采用高速逆流色譜法對(duì)蘆薈苷初提物進(jìn)行了進(jìn)一步分離純化。首先，比較了9種預(yù)選定的溶劑體系的分層時(shí)間、上下相體積比、樣品分配系數(shù)情況，最終確定用V(氯仿)∶V(正丁醇)∶V(甲醇)∶V(水)=4∶0.28∶3∶2作為本研究分離蘆薈苷的

4、的溶劑體系，上相為固定相，下相為流動(dòng)相。此后對(duì)用高速逆流色譜進(jìn)行蘆薈苷分離純化的最佳操作工藝條件進(jìn)行了研究。研究了主機(jī)轉(zhuǎn)速、流動(dòng)相流速、循環(huán)水浴溫度以及上樣濃度對(duì)分離純化的影響，最終確定的最佳操作參數(shù)為轉(zhuǎn)速870r/min正向洗脫、流動(dòng)相流速2ml/min、管柱溫度25℃、上樣濃度6mg/ml、檢測(cè)波長(zhǎng)360nm。結(jié)果表明，在此操作條件下，蘆薈苷的乙醇提取物能得到很好的分離。而且，圖譜上的峰分離效果很好，清晰可見(jiàn)，沒(méi)有“毛刺”。收集高速

5、逆流色譜分離后的各峰流出液，先經(jīng)薄層色譜分析，再經(jīng)HPLC進(jìn)行分析鑒定，結(jié)果顯示組分Ⅰ蘆薈苷A的純度為96％，組分Ⅱ蘆薈苷B的純度為93％，組分Ⅲ的純度為87％。
　　 第三部分，對(duì)高速逆流色譜分離出來(lái)的組分Ⅲ進(jìn)行紅外光譜測(cè)試，核磁共振氫譜測(cè)試以及質(zhì)譜測(cè)試。再分析、綜合紅外，核磁，質(zhì)譜分析的結(jié)果后，推測(cè)出該物質(zhì)的分子式為C37H51NO10，結(jié)構(gòu)式為：
　　 最后，本研究在前人研究蘆薈的防曬、保濕功能的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探討

6、蘆薈苷成分的防曬保濕性能。將提取的蘆薈苷添加到化妝品中，檢測(cè)其防曬性能、高濕環(huán)境中的保濕性能、以及低濕環(huán)境中的吸濕性能。結(jié)果顯示蘆薈苷的含量越高，防曬效果越好，當(dāng)蘆薈苷含量達(dá)到0.05mg/ml時(shí)，80％的紫外線可以被全部吸收；且在模擬的人體出汗情況下，紫外吸收沒(méi)有紅移或者藍(lán)移現(xiàn)象，可以作為抗干擾的紫外吸收劑；蘆薈苷具有較好的保濕吸濕性能并呈現(xiàn)一定的正向劑量效應(yīng)關(guān)系。蘆薈苷在高濕環(huán)境中的吸濕性能優(yōu)于其在低濕環(huán)境中的保濕性能。在高濕環(huán)境中