貫葉金絲桃活性成分的高速逆流色譜分離純化方法研究.pdf

1、中藥貫葉金絲桃是極具開發(fā)潛力的天然藥物，具有清熱解毒、抗菌消炎、消腫止血、利濕止痛等中醫(yī)功效，以及抗抑郁、抗病毒、抗癌、抗菌、鎮(zhèn)痛等藥理活性。其化學成分金絲桃素、貫葉金絲桃素、金絲桃苷等被認為是發(fā)揮藥理活性的主要成分，其中，貫葉金絲桃素被認為是抗抑郁的主要活性成分；金絲桃素在抗病毒和抗腫瘤等方面作用顯著；金絲桃苷具有明顯的抗炎、止咳、鎮(zhèn)痛等作用。這些化學成分被用于相關藥物的質量控制和進一步的新藥開發(fā)，具有重要的研究價值。 貫葉金

2、絲桃活性成分的提取純化難度很大。雖然貫葉金絲桃中有效成分的活性較高，但在植物中甚至是市售的粗提物中含量都很低，這給活性成分的進一步分離純化帶來很大的困難；另外，貫葉金絲桃素和金絲桃素都屬于光敏性、熱不穩(wěn)定物質，在遇光和遇熱情況下較易發(fā)生變化而氧化及失活，這也是這些成分提取困難，提取物中含量較低的原因之一。目前國內外對貫葉金絲桃分離提取，尤其是精制高純度單體的研究很少。 本論文采用高速逆流色譜法(HSCCC)分離純化貫葉金絲桃中的

3、貫葉金絲桃素、貫葉金絲桃素氧化物、金絲桃素、黃酮類物質(包括金絲桃苷和一種未知物質)等五種活性成分，研究內容主要包括以下方面： 1．建立五種成分的HPLC分析方法。對于金絲桃素的分析難度較大，實驗時購買了金絲桃素對照品；對于沒有對照品的貫葉金絲桃素、黃酮類物質等，主要利用HPLC—DAD、HPLC—MS、UV等方法，最終確定了其HPLC分析方法。所建立五種物質的HPLC分析方法包括等比例洗脫和梯度洗脫方式，用到的試劑主要包括甲醇

4、、乙腈、四氫呋喃、水等。這就為為貫葉金絲桃活性成分分離提取和質量控制提供了基礎。 2．建立了貫葉金絲桃的粗提取方法。根據(jù)相似相溶原理，選擇不同極性的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇溶劑依次對市購粗提物粉末進行提取，通過單因素考察法對萃取法、溶劑加熱回流法、溶劑超聲提取法進行考察，最后選擇了選擇最適合的粗提取方法即溶劑超聲提取法。 3．分別建立五種成分高純度單體的 HSCCC 分離純化方法，包括溶劑體系的篩選、分離條件的選擇優(yōu)化和

5、樣品的分離。使用逆流色譜的方法，從石油醚超聲提取物A中純化出貫葉金絲桃素(HF)單體和貫葉金絲桃素氧化產(chǎn)物(HF')單體；從乙酸乙酯超聲提取物B中純化出金絲桃素(HR)單體；從正丁醇超聲提取物C中純化出金絲桃苷(HS)單體和一種未知單體成分(HS—5)單體。 4．對分離所得五種單體成分進行了進一步的結構鑒定，采用了包括紫外可見光譜分析、液質聯(lián)用分析、核磁共振分析等方法。 5．用已建立的方法制備出一定量高純度的五種成分單體