基于生物素暴露磁分離方法的建立及用于單增李斯特菌活菌檢測的研究.pdf

1、單增李斯特菌是一種嚴重威脅人類健康的食源性致病菌，WHO食品安全工作計劃已將其列入重點監(jiān)測對象。該菌可耐受高鹽和較寬的pH，并且4℃條件下仍可生長和繁殖，使其在食品加工和儲存過程中難以控制。因此，建立靈敏快速的單增李斯特菌檢測方法對于及時控制該菌的污染和擴散具有重要意義。免疫磁分離技術是食源性致病菌快速富集的有效手段，傳統(tǒng)的免疫磁分離方法中免疫磁珠用量較大，使得磁分離成本較高。本研究為了降低免疫磁分離的成本，建立了基于生物素放大暴露的磁

2、富集分離方法，并聯(lián)合PMA-PCR技術和核酸層析試紙條或流式細胞術實現(xiàn)了生菜中單增李斯特菌活菌的檢測。各章內(nèi)容分述如下：
　　第一章綜述了磁性納米粒子在食源性致病菌檢測中應用的研究進展。
　　第二章建立了基于生物素暴露及放大的磁富集分離方法。研究中首先將生物素化抗體與單增李斯特菌孵育，從而使菌體表面暴露出生物素，隨后加入鏈霉親和素修飾的磁性納米粒子與菌體表面暴露出的生物素結合，并在磁場下完成單增李斯特菌的富集分離。相對于傳統(tǒng)

3、的基于免疫磁珠的分離方法，生物素暴露的磁富集分離方法抗體用量降低了10倍；在最佳的磁分離條件下，當PBS或生菜樣本中單增李斯特菌濃度低于104 CFU/mL時的富集分離效率高于91.8％±1.3%。在基于聚酰胺-胺（PAMAM）樹枝狀分子介導的生物素放大的磁富集分離方法中，生物素放大進一步降低了抗體用量，縮短了鏈霉親和素修飾的磁性納米粒子靶向單增李斯特菌的時間，同時降低了磁性納米粒子的用量。相對于傳統(tǒng)的基于免疫磁珠的分離方法，PAMAM

4、介導的生物素放大的磁富集分離方法抗體用量降低了20倍；鏈霉親和素修飾的磁性納米粒子的用量降低了40%；單增李斯特菌的富集時間縮短了50%。在最佳的磁分離條件下，當PBS或生菜樣品中單增李斯特菌濃度低于104 CFU/mL時的富集分離效率均高于89.15%±1.75%。
　　第三章建立了基于PMA-PCR的單增李斯特菌活菌檢測方法，聯(lián)合核酸層析試紙條或流式細胞術實現(xiàn)了生菜樣本中單增李斯特菌活菌的檢測。PMA的用量為10μg/mL，鹵