聚陽(yáng)離子材料殼聚糖

1、本文格式為 本文格式為 Word 版，下載可任意編輯 版，下載可任意編輯— 1 —聚陽(yáng)離子材料殼聚糖 聚陽(yáng)離子材料殼聚糖聚乙烯亞胺-DNA 復(fù)合物的制備和體外細(xì)胞轉(zhuǎn)染測(cè)驗(yàn) 測(cè)驗(yàn)導(dǎo)讀 目前常用的轉(zhuǎn)基因載體包括病毒載體和非病毒轉(zhuǎn)基因載體兩大類(lèi)。病毒載體包括逆轉(zhuǎn)錄病毒(retrovirus)、腺病毒(adenovirus，AV)、腺相關(guān)病毒(adeno-associatedvirus，AAV)、a-病毒載體以及單純皰疹病毒(herpes

2、 simplex virus,HSV)等，由于病毒具有感染細(xì)胞的才能，攜帶外源基因進(jìn)入靶細(xì)胞的過(guò)程屬于一個(gè)主動(dòng)過(guò)程，所以往往具有較高的轉(zhuǎn)基因效率，但病毒載體總體來(lái)說(shuō)具有一些難以抑制的缺陷，如制備繁雜、攜帶才能有限、靶向特異性差、高免疫原性、體內(nèi)不能重復(fù)使用、可能導(dǎo)致感染的潛在危害和引起細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化等，這也是雖然病毒載體研究時(shí)間較長(zhǎng)，但獲得臨床斷定的為數(shù)不多的理由之一。而非病毒轉(zhuǎn)基因載體由于具有合成簡(jiǎn)樸、可以攜帶大容量的遺傳物質(zhì)、無(wú)免疫原

3、性、無(wú)感染和惡性轉(zhuǎn)化潛能等優(yōu)點(diǎn)，因此正受到越來(lái)越多的研究者的關(guān)注。 夢(mèng)想的非病毒載體需要得志以下條件：（1）養(yǎng)護(hù) DNA不被細(xì)胞外 DNA 降解酶的降解；（2）攜帶 DNA 穿透細(xì)胞膜；（3）養(yǎng)護(hù) DNA 在進(jìn)入核前不被細(xì)胞內(nèi)溶酶體和酶等降解；（4）能有效將有活性的基因插入目的區(qū)；（5）可生本文格式為 本文格式為 Word 版，下載可任意編輯 版，下載可任意編輯— 3 —由于聚陽(yáng)離子帶有多級(jí)胺，故表現(xiàn)出較強(qiáng)的正電荷效應(yīng)，而質(zhì)粒 DNA

4、 為負(fù)電荷分子，因此，兩者在溶液中可以通過(guò)靜電引力而形成納米微粒復(fù)合物。本測(cè)驗(yàn)將用聚乙烯亞胺為陽(yáng)離子載體材料，用螢火蟲(chóng)熒光素酶真核表達(dá)質(zhì)粒pCAG（帶有 pCMV 啟動(dòng)子）舉行復(fù)合物的制備，用 COS7細(xì)胞為研究對(duì)象，查看聚乙烯亞胺載體材料攜帶質(zhì)粒 DNA在細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染處境。下圖即為聚陽(yáng)離子載體材料與質(zhì)粒DNA 形成復(fù)合物并在細(xì)胞內(nèi)運(yùn)轉(zhuǎn)的示意圖。 圖 1 聚陽(yáng)離子載體材料與質(zhì)粒 DNA 形成復(fù)合物并在細(xì)胞內(nèi)運(yùn)轉(zhuǎn)的示意圖 一、測(cè)驗(yàn)?zāi)康?/p>