副干酪乳桿菌hd1.7prck基因敲除載體構建及其電轉化條件初步確立

1、黑龍江大學碩士學位論文副干酪乳桿菌HD1.7prcK基因敲除載體構建及其電轉化條件初步確立姓名：張嵐申請學位級別：碩士專業(yè)：微生物學指導教師：葛菁萍20080428黑龍江大學碩士學位論文A b s t r a c tA s e r i e s o f p r i m e r sw e r e d e s i g n e d a n d s y n t h e s i z e d a c c o r d i n g t o t h e r

2、 e l a t i v ef r a g m e n t sa n dt h eC o n s e r v a t i v ed o m a i no f c o m p l e t e s e q u e n c e so f p r c Ka n dp r c Ro fL a c t o b a c i l l u sp a r a c a s e iH D 1 ．7 ，w h i c hh a v eb e e nr e c o

3、 r d e db yt h eG e n B a n k ．A n dt h ef r a g m e n t o f H i s t i d i n e p r o t e i n k i n a s e ，n a m e d p r c K 一5 5 0 ，w a s o b t a i n e df r o mL a c t o b a c i l l u sp a r a c a s e iH D l ．7b yP C R a

4、 n dw a s c l o n e di m op U C I 8 v e c t o rb yt r a n s f o r m a n t ．I nt h i ss t u d y , t o i d e n t i f i c a t e t h e f u n c t i o n o f p r c K g e n e ，g e n e k n o c k - o u t v e c t o r n a m e dp U C

5、 l8 - p r c K - ·5 5 0 ··t e tw e r e c o n s t r u c t e db yi n s e r t i n gat e t r a c y c l i n e - ·r e s i s t a n t g e n e i n t op r c K 一5 5 0 ，w h o s es i n g l es i t e w a sb r e a k a

6、 g e db ye n z y m a t i cd i g e s t i o no f C l a I ．T h e nt h ev e c t o r w a st r a n s f o r m e d i n t oE ．c o l iD H 5 a ，a n d t h et r a n s f c l r m e d b a c t e r i aw a s r e s i s t a n tt ot e t r a c

7、 y c l i n e ．T h eo p t i m i z e d p a r a m e t e r s a f f e c t i n gh i g h —e f f i c e n te l e c t r o t r a n s f o r m i n go fp l a s m i dp M G 3 6 e i n t oL a c t o b a c i l l u s p a r a c a s e iH D 1 ．

8、7w e r e s t u d i e dp r e l i m i n a r i l y ．I ts h o w e d t h a tah i g h e s te l e c t r o —t r a n s f o r m a t i o ne f f i c i e n c y c o u l db eo b t a i n e dw h e nt h e r e c i p i e n t c e l lW a s t

9、r e a t e db y1 ％o f g l y c i n ea n dw a s h e d b ye l e c t r o t r a n s f o r m a t i o n b u f f e ro fA E B 1 ，a sw e l la st h e9 k V ／c mo f f i e l ds t r e n g t ha n d o n e t i m eo f p u l s e w i t ht h e

10、O D 6 0 0 啪v a l u eo fO ．7 8 ．T h ep u r p o s eo ft h i s s t u d yi st oc o n s t r u c tt h ep r c K k n o c k —o u t v e c t o rb yc l o n i n gg e n eo f H i s t i d i n ep r o t e i n k i n a s e ( p r c K ) ，w h

11、i c hw a s o n eo f t h ep u t a t i v eq u o r u m s e n s i n gg e n e s ．A n dt h ep r e l i m i n a r ys t u d yo nt h ee l e c t r o t r a n s f o r m a t i o nc o n d i t i o no f H D 1 ．7l a i dt h e f o u n d a t

12、 i o n f o r t h e c o n s t r u c t i o n o fp r c K g e n e d e l e t i o n m u t a t i o na n d r e v e r s a lm u t a t i o n a n d t h ef u r t h e r s t u d i e so n t h ef u n c t i o n o f p r c K ．K e y w o r d