ⅰ.doxycycline誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡及其機(jī)制;ⅱ.gdnf修飾的人羊膜上皮細(xì)胞在大鼠mcao模型中的治療作用

1、中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所博士學(xué)位論文Ⅰ.Doxycycline誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡及其機(jī)制;Ⅱ.GDNF修飾的人羊膜上皮細(xì)胞在大鼠MCAO模型中的治療作用姓名：武家才申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師：郭禮和20060601第一部分D o x y c y c l i n e 誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡及其機(jī)制第一章D o x y c y c l i n e 誘導(dǎo)H e L a 細(xì)胞凋亡機(jī)制摘要強(qiáng)力霉素( D o x y

2、 c y c l i n e ，D c ) 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡及其在腫瘤動物模型中的治療作用已有報(bào)道，其治療作用主要是通過抑制細(xì)胞金屬基質(zhì)蛋白酶表達(dá)及細(xì)胞色素C 氧化酶活力來抑制細(xì)胞轉(zhuǎn)移、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，但D c 誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的機(jī)制還不清楚。本章研究了線粒體，c a l p a i n 和c a s l 娜e 在D c 誘導(dǎo)H e L a 細(xì)胞凋亡過程中的作用。通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)及D N A l a d d 盯分析證明D c 能夠誘導(dǎo)H e L

3、 a 細(xì)胞發(fā)生顯著凋亡，并且這一過程具有藥物濃度和時(shí)間依賴性。廣泛性c 鷸p a S e ( 半胱氨酸天冬氨酸特異蛋白酶) 抑制劑( z V A D —r i n k )及c 硒p a s e ．8 ，．9 特異抑制劑( z I E T D —f m k , z L E H D ．f m k ) 抑制分析表明，D c 誘導(dǎo)的凋亡具有c 船p 嬲e 活力依賴性。W e s t e r n b l o t 檢測到c a S p 船e 一3

4、，．9 ，．8 及c a l p a i n I ( 鈣依賴蛋白酶I ) 發(fā)生了活化，但c 鵲p 嬲e - 2 活化沒有被檢測到。在胞漿蛋白中可以檢測到從線粒體中釋放的細(xì)胞色素c ( C y tc ) 和S m a c ，并且這兩種蛋白的釋放不能被z V A D —f m k和z I E T D ．f m k 所抑制。進(jìn)一步通過使用各種蛋白酶抑制劑，結(jié)合W e s t e r n b l o t 和細(xì)胞凋亡分析證明，c a s p a

5、s e - 9 可能作為起始c a s p 嬲e 通過線粒體途徑活化，而c 船p a s e - 8 主要通過c a s p 船e ．9 和c a l p a i n 途徑活化。C a s p a s e ．8 和．9 的特異抑制劑對c a s p 嬲e - 3 的活化都有抑制作用，但前者抑制作用更強(qiáng)，這一結(jié)果與凋亡抑制分析結(jié)果一致。抑制c a s p 髂e 一8活力后檢測細(xì)胞凋亡率及c 船p 嬲e ．3 活化，結(jié)果證明在D c 誘導(dǎo)的