ptdins4，5p,2的動(dòng)態(tài)觀察及膜脂質(zhì)環(huán)境對(duì)內(nèi)向整流性鉀離子通道kir2.0亞家族功能調(diào)節(jié)的研究

1、河北醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文PtdIns（4，5）P的動(dòng)態(tài)觀察及膜脂質(zhì)環(huán)境對(duì)內(nèi)向整流性鉀離子通道Kir2.0亞家族功能調(diào)節(jié)的研究姓名：王川申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：藥理學(xué)指導(dǎo)教師：張海林20050401中 文 摘 要又 稱“ 脂 筏” ( l i p i d r a f t ) 的 觀 點(diǎn)， 脂 筏 特 指 膜 脂 質(zhì) 雙 層內(nèi) 含 有 特 殊 脂 質(zhì) 及蛋白的微區(qū)， 許多信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白以 及通道蛋白 就定位在這些微區(qū)中， 無(wú)論是可興奮細(xì)胞或

2、非興奮細(xì)胞，都存在著脂筏。脂筏的主要成分是膽固醇( c h o l e s t e r a l ) 和 鞘 磷 脂 ( s p h i n g o l i p i d s ) ， 而P I P : 和 花生四 烯 酸 ( 2 0 : 4 )( a r a c h i d o n i c a c i d , A A ) 是 脂筏中另 外兩種重 要的 脂質(zhì)成分。內(nèi) 向 整流性鉀離子通道( K i r ) 是一類在多種組織中廣泛分布的鉀

3、離子通道， 自1 9 9 3年克隆了第一個(gè) K i r 通道至今，己經(jīng)發(fā)現(xiàn)有約 2 0 個(gè)成員，構(gòu)成了一個(gè)由七個(gè)亞家族 ( K i r l . x - K i r 7 . x ) 組成的超家族。 K i r 2 . x主要表達(dá)于心臟、骨骼肌和神經(jīng)系統(tǒng)， 其電流表現(xiàn)很強(qiáng)的內(nèi)向整流特性， 它在維持心臟及腦組織的興奮性方面有重要的意義。 近年來(lái)， 許多實(shí) 驗(yàn)顯示 P I P : 對(duì) K i : 的 功能有重要的調(diào)節(jié)作用: 同時(shí)另有一些實(shí)驗(yàn)資料

4、顯示膽固醇和A A對(duì)在體細(xì)胞的 K i r 有直接或間接的作用，但這種作用對(duì)不同通道亞型的 特異性如何?以 及這種特異性作用與 P I P : 有何關(guān)系?目 前未見(jiàn) 報(bào)道。 故本 研究的第三，四部分將分別以非洲爪蟾卵母細(xì)胞和中國(guó)倉(cāng)鼠軟巢 ( C H O)細(xì)胞株為表達(dá)系統(tǒng)， 表達(dá)不同 類型的K i r 2 . 0 亞家族鉀通道， 研究膽固醇和A A對(duì)這些通道的 特異性作用以 及P I P : 與這種作用關(guān)系。一、 動(dòng) 態(tài) 觀 察 不同 的

5、 藥理 性阻 斷 劑 對(duì)膜 磷 脂 P t d l n s ( 4 , 5 ) P : 的 代謝 過(guò) 程的影響特征目的:時(shí)空觀察 G 蛋白偶聯(lián)受體 ( G P C R )和受體酪氨酸蛋白激酶( R T K ) 信 號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑引 起P I P , 在細(xì)胞內(nèi) 水 解及再合成的 動(dòng)態(tài) 變化過(guò) 程，并比 較握 曼青霉素( w o r t m a n n i n ) . 氯化 鏗 ( L i C I ) . U 7 3 1 2 2和新霉 素四

6、種阻斷劑對(duì)P I P 2 代謝過(guò)程的影響。方法: 利用綠色熒光蛋白 ( G F P ) 與磷脂酶 C s , ( P L C 6 , ) P H 區(qū)( P L C s , P H ) 的融 合體( P L C S , P H - G F P ) 作為 標(biāo)記P I P : 的 特異 性熒 光 探針，使用激光掃描共聚焦顯微鏡技術(shù)動(dòng)態(tài)觀察及測(cè)量 P I P : 代謝過(guò)程中位置的變化。結(jié)果: 在 C H O細(xì)胞或 C O S - 7 細(xì)胞

7、， 用 A T P 刺激內(nèi) 源性表 達(dá)的P 2 Y受體 或用胰島 素 刺激內(nèi) 源性表達(dá)R T K時(shí)， 可引 起P L C s , P H - G F P 熒光轉(zhuǎn) 位可 恢 復(fù) 性的 變 化; 握 曼 青 霉素 ( 1 0 } a M ) 和L i C I ( I O m M ) 不 影響A T P 引 起P L C激活所介導(dǎo)的P L C s , P H - G F P 熒光由 胞膜到胞漿的 轉(zhuǎn)位變化， 但可阻斷此轉(zhuǎn)位的 恢復(fù);