病原微生物分子分型技術(shù)研究進(jìn)展_論文

1、111病原微生物分子分型技術(shù)研究進(jìn)展病原微生物分子分型技術(shù)研究進(jìn)展現(xiàn)代分子分型技術(shù)主要包括質(zhì)粒DNA圖譜分析、限制性內(nèi)切酶消化后的染色體DNA分析、核酸探針雜交、脈沖場凝膠電泳(PFGE)、PCR和多位點序列分析(MLST)技術(shù)。DNA重復(fù)序列PCR技術(shù)(RepPCR)的實用性強(qiáng)、低用費、可再現(xiàn)性好，可用來進(jìn)行普查工作。PFGE技術(shù)分辨力高，是病原微生物分子分型的最佳選擇。而有更高分辨力和再現(xiàn)力的MLST新技術(shù)正在逐漸被使用。這些分子分

2、型技術(shù)將有助于在全球范圍內(nèi)進(jìn)行病原微生物流行病學(xué)研究。本文對近年來常用的病原微生物分子分型技術(shù)的研究進(jìn)展作一綜述。1評估分型技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)的可行性評估一項分型技術(shù)是否可行的標(biāo)準(zhǔn)有2個：完成標(biāo)準(zhǔn)(有效性)和便利標(biāo)準(zhǔn)(效率性)。完成標(biāo)準(zhǔn)包括分型能力、分辨力和分型技術(shù)間的一致性，而便利標(biāo)準(zhǔn)包括通用性、快捷性、解釋和執(zhí)行的容易程度。一項分型技術(shù)的分型能力意味著通過這項分型技術(shù)，分離株被劃分為所屬類型的比例。再現(xiàn)性是指通過這種技術(shù)對同種樣品在重復(fù)檢測時

3、，產(chǎn)生相同結(jié)果的能力。分辨力是指擁有一致的或非常相似的相關(guān)圖譜的分離株事實上具有相同的傳播途徑的可能性。2種分型技術(shù)的一致性通過使用這些技術(shù)把高度相似的分類株分組歸類而被評價〔1，2〕。因此，對一種分型技311性(超螺旋的、斷口的和線形的)而被影響，而凝膠電泳時具有不同遷移速度。大多數(shù)病原微生物有質(zhì)粒，但沒有質(zhì)粒的就不能用此技術(shù)分型。此外，由于有些分離株中含有1個或2個質(zhì)粒，會使菌株間的分辨力降低〔4〕。22染色體DNA限制性內(nèi)切酶分

4、析技術(shù)染色體DNA經(jīng)限制性核酸內(nèi)切酶消化，消化后的片段再通過瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分離。用限制性內(nèi)切核酸酶BglⅡ和EcI等消化病原微生物基因組DNA，因為它們對染色體上的酶切位點非常敏感，可以產(chǎn)生大量短的片段。電泳后，將獲得一系列被分離的DNA圖譜。通過比較圖譜，就可以進(jìn)行菌相似性研究。幾乎所有的病原微生物分離株都可以通過這種方法分型，但由于基因組DNA巨大，酶切后產(chǎn)生的片段眾多，且含有大量的重疊片段，這將導(dǎo)致菌株間圖譜一致性分析產(chǎn)生困難