病原微生物采集運輸要求講義

1、病原微生物采集與運送,主要內(nèi)容1、病原微生物的分類2、病原微生物的采集3、病原微生物的運送4、高致病性病原微生物的運輸要求,1、病原微生物的分類,病原微生物：是指能夠使人或者動物致病的微生物。,1.1、病原微生物的分類,我國在《病原微生物實驗室生物安全管理條例》中按危害程度，將病原微生物分為四類：第一類病原微生物，是指能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。第二類病原微生物，是指能

2、夠引起人類或者動物非常嚴重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。第三類病原微生物，是指能夠引起人類或者動物疾病，但一般情況下對人、動物或者環(huán)境不夠成嚴重危害，傳播風險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病，并且具備有效治療和預防措施的微生物。第四類病原微生物，是指在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物。第一類、第二類病原微生物統(tǒng)稱為高致病病原微生物。,《人間傳染的病原微生物名錄》介紹,為了規(guī)范

3、人間傳染的病原微生物的實驗室操作，確保實驗室安全衛(wèi)生部制訂了《人間傳染的病原微生物名錄》（以下簡稱《名錄》），《名錄》已于2006年1月11日下發(fā)。編寫依據(jù)： 中華人民共和國傳染病防治法 《病原微生物實驗室生物安全管理條例（2004 .11.12) 中華人民共和國國家標準（GB19489-2004） 《實驗室生物安全通用要求》 《危險品航空安全運輸技術(shù)細則》VS聯(lián)合國編號 (UN28

4、14 和UN3373),1.2、應城市疾控中心病原微生物檢驗項目類別,三類病原微生物： 致瀉性大腸埃希氏菌、沙門氏菌、志賀氏菌、副溶血弧菌、金黃色葡萄球菌、蠟樣芽胞桿菌等6種（實驗活動：食品、環(huán)境、可疑樣品病原菌檢測 ）。 甲肝病毒、乙肝病毒、麻疹病毒、風疹病毒（實驗活動：免疫人群抗體水平檢測 ） 流行性感冒病毒（非H2N2亞型）（實驗活動：樣本采集與送檢）,二類病原微生物 結(jié)核桿菌 （實驗活動：可疑人

5、群痰檢及結(jié)核菌培養(yǎng) ） 霍亂弧毒（實驗活動：疫源地、外環(huán)境及可疑人群病原檢測） HIV病毒（實驗活動：可疑人群血清HIV抗體初篩） 乙腦病毒、脊灰病毒、狂犬病毒（實驗活動：免疫人群抗體水平檢測及相關(guān)流行病學調(diào)查 ） 口蹄疫病毒 、高致病性禽流感病毒 、SARS冠狀病毒 （實驗活動：樣本采集與送檢及相關(guān)流行病學調(diào)查 ）,2、病原微生物采集,標本采集的部位、時間、質(zhì)量 是決定檢測

6、結(jié)果第一條件采集標本時：早、快、近（病變部位）、多、凈,樣本采集注意事項,1. 生物安全防護水平設備（個人防護用品、防護材料、器材和防護設施）2．人員:掌握專業(yè)知識和操作技能3. 措施:有效防止病原微生物擴散和感染4. 保證樣本質(zhì)量: 技術(shù)方法、手段5.詳細記錄：來源、采集過程和方法等,采樣的規(guī)范性 -獲得可靠實驗室檢測結(jié)果,方法：正確時間：合理數(shù)量：足夠品種：多個（同一病人、環(huán)境）保

7、存：妥善（不同樣品、不同條件）運輸：安全,采集的復雜性,同一個病人采集多種標本 血液/血清 鼻咽拭子 糞便/肛拭子 腦脊液 組織一起疫情多次采樣(回顧性的、新發(fā)病人、恢復期病人)環(huán)境標本 水體、食物、動物、媒介,樣本采集注意點,生物安全：個人防護 容器可靠: 無菌、耐壓、防滲漏防止交叉污染：采樣中、物品使用

8、記錄與編號 ：及時、準確,溫度對病毒的影響,病毒對熱不穩(wěn)定 55～60 ℃數(shù)分鐘，病毒的衣殼蛋白質(zhì)就發(fā)生變性，使病毒失去感染力。離體以后，甚至體溫也會使一些病毒喪失活性。4℃ 幾天 (凍干，長期） - 70 ℃ 幾個月～幾年-196 ℃ 長期病毒必須低溫儲藏。,短期保存 運輸,保持低溫避免反復凍融到實驗室前 4 ℃ 24hr

9、-70 ℃ days,離子環(huán)境和PH,所有的病毒都應放在等滲和生理PH環(huán)境中，對離子環(huán)境和PH的允許界限相當寬，但不同的病毒有差異。,輻 射,用電離輻射(X線、丙種射線、非電離輻射如紫外線)能對病毒滅活。幾乎所有的電離輻射都引起多核苷酸鏈致命的毀壞，雙股核苷酸鏈的某一個部分斷列都能使病毒致死。 紫外線: DNA的損害是使核苷酸相鄰的嘧啶鹼基二聚物 RNA病毒形成尿嘧啶二聚物所致死。,禽流感標本采集,下呼吸道

10、標本－灌洗液、痰上呼吸道標本－鼻咽拭子、抽取液血清－雙份(溶血）其他－消化道/尸檢標本,SARS標本采集,呼吸道標本－鼻咽拭子 血標本－全血，血清（雙份)消化道標本－糞便其他－尿液/尸檢標本,手足口病,皰疹液腦脊液血清 咽拭子糞便,AFP(急性遲緩性麻痹）,雙份糞便（48hr內(nèi)采集）質(zhì)量：≧5g病人年齡≦15歲帶冰運輸資料：送檢單， 個案表，,3、病原微生物運輸?shù)囊?運輸實施,陸路運輸水路運輸

11、民用航空運輸：申請單位應當憑省級以上衛(wèi)生行政部門或中國疾病預防控制中心核發(fā)的《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本準運證書》到民航等相關(guān)部門辦理手續(xù)。,分類,《名錄》中第三類病原微生物運輸包裝分類為Ｂ類的病原微生物菌（毒）種或樣本?！睹洝分械谒念惒≡⑸铩?包裝的要求,基本要求要有三層包裝： 1、主容器：采樣管內(nèi)裝標本，材質(zhì)為無菌塑料管、螺口、密封性能完好。 其外包裹有的吸收材料。 2、輔助容器：

12、要求要防水、防泄漏。（專用塑料袋） 3、外包裝：樣本運送箱,其他,送檢單要隨身攜帶，不要跟樣品放在一起。樣本保存溫度的要求。（常溫、低溫）。,運送要求,按國家運輸規(guī)定中應由兩名專業(yè)的技術(shù)人員運送。,4、高致病性病原微生物的運輸要求,衛(wèi)生部第45號令 《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸管理規(guī)定》 2006年2月1日起施行,高致病性病原微生物樣本分類,國際民航組織《危險物品航空安全運輸技術(shù)細

13、則》分類包裝要求，將相關(guān)病原和樣本分為A、B 兩類。聯(lián)合國編號分別為UN2814（UN2900動物）和UN3373。,A類感染性物質(zhì),一類在運輸中，一旦有暴露發(fā)生，即能夠在所有人類和動物中引起永久性殘疾、導致威脅生命或致命疾病的傳染性物質(zhì)。 達到該標準的能引起人體疾病或引起人與動物疾病的感染性物質(zhì)的聯(lián)合國編號為UN2814，而只能引起動物疾病的該類感染性物質(zhì)則為UN2900 。,B類感染性物質(zhì),沒有達到歸屬為A類標準的感染性

14、物質(zhì)。B類感染性物質(zhì)的編號為UN3373。生物制品，B類” （Biological substance, Category B）,包裝要求,運輸高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本的容器或包裝材料應當達到國際民航組織《危險物品航空安全運輸技術(shù)細則》（Doc9284包裝說明PI602）規(guī)定的A類包裝標準，符合防水、防破損、防外泄、耐高溫、耐高壓的要求，并應當印有衛(wèi)生部規(guī)定的生物危險標簽、標識、運輸?shù)怯洷?、警告用語和提示用語。,基本三層包

15、裝系統(tǒng),可以應用于所有的感染性物質(zhì):主容器。初級容器防水、防滲漏，內(nèi)裝標本。其外包裹有的吸收材料。次級包裝。次級包裝為第二層持久的、防水、防滲漏的包裝，它封閉和保護初級容器。多個包有緩沖材料的初級容器可放于同一個次級包裝中，但是，這要求同時也放入足夠的吸收材料以確保一旦發(fā)生泄漏后所有液體都可被吸收。外層包裝。次級包裝包裹有合適的緩沖材料后，即可被裝入外層運輸包裝。外層運輸包裝保護其內(nèi)容物免受外界影響，如運輸過程中的物理損壞。最小的

16、外部總尺寸應為10x10 cm。,主容器包裝要求,病原微生物菌（毒）種或者樣本應正確盛放在主容器內(nèi)，主容器要求無菌、不透水、防泄漏。主容器可以采用金屬或塑料等材料，必須采用可靠的防漏封口。主容器外面要包裹有足夠的樣本吸收材料，一旦有泄漏可以將所有樣本完全吸收。主容器的表面貼上標簽，標明標本類別、編號、名稱、樣本量等信息。,輔助容器,輔助容器是在主容器之外的結(jié)實、防水和防泄漏的第二層容器，它的作用是包裝及保護主容器。多個主容器裝入一

17、個輔助容器時，必須將它們分別包裹，防止彼此接觸，并在多個主容器外面襯以足夠的吸收材料。相關(guān)文件（例如樣品數(shù)量表格、危險性申明、信件、樣品鑒定資料、發(fā)送者和接收者信息）應該放入一個防水的袋中，并貼在輔助容器的外面。輔助容器必須用適當?shù)囊r墊材料固定在外包裝內(nèi)，在運輸過程中使其免受外界影響，如破損、浸水等。,冷凍劑的使用,在使用冰、干冰或其他冷凍劑進行冷藏運輸時，冷凍劑必須放在輔助容器和外包裝之間，內(nèi)部要有支撐物固定，當冰或干冰消耗以后，仍

18、可以把輔助容器固定在原位置上。如使用冰，外包裝必須不透水。如果使用干冰，外包裝必須能夠排放二氧化碳氣體，防止壓力增加造成容器破裂。在使用冷凍劑的溫度下，主容器和輔助容器必須能保持良好性能，在冷凍劑消耗完以后，仍能承受運輸中的溫度和壓力。當使用液氮對樣品進行冷藏時，必須保證主容器和輔助容器能適應極低的溫度。此外，還必須符合其他有關(guān)液氮的運輸要求。主容器和輔助容器須在使用制冷劑的溫度下，以及在失去制冷后可能出現(xiàn)的溫度和壓力下保持完好無損

19、。主容器和輔助容器必須在無泄漏的情況下能夠承受95kPa的內(nèi)壓，并能保證在－40℃到＋55℃的溫度范圍內(nèi)不被損壞。,A類感染性物質(zhì)的包裝與標簽,B類感染性物質(zhì)的包裝與標簽,外包裝標示提供了所包裝內(nèi)容物的信息，危險的性質(zhì)和應用的包裝標準。包裝或第二層包裝的所有標示都應清楚可見并且沒有被其他標簽或標示所覆蓋。每一個包裹都應在其外包裝或第二層包裝上顯示如下信息：－寄件人的姓名和地址－責任人的電話號碼和出貨信息－收貨人的姓名和地址－聯(lián)合

20、國編號緊跟恰當?shù)呢浳锩Q（UN2814“感染人類的傳染性物質(zhì)”或者UN2900“影響動物的傳染性物質(zhì)”）。專業(yè)名稱不允許出現(xiàn)在外包裝上。－儲藏溫度（選擇）－當使用干冰或液氮時：制冷劑的專業(yè)名稱，正確的聯(lián)聯(lián)合國編號和凈重,標 示,標簽名稱： 感染性物質(zhì)最小尺寸： 100 × 100 mm （最小包裝 50 × 50 mm） 每一包裝的標簽數(shù)： 1顏色：黑色和白色“感染性物質(zhì)”字樣應該標明。在一些國家還要求

21、印有“一旦循壞和泄露，立即通知公共衛(wèi)生機構(gòu)”的語句,有兩種類型的標簽：45°角放置的方形（菱形）危險性標簽，絕大多數(shù)的各類危險性貨物都要求有此標簽；具有多種形狀的管理標簽，一些危險性貨物要求有單獨或附加于危險性標簽的該類標簽。 專門的危險性標簽應貼于每一運輸?shù)奈ｋU性貨物的外表面（除特殊的例外）。,,,標 簽,高致病性病原微生物運輸?shù)怯洷?標 記· 航空：發(fā)貨人姓名，地址和電話號碼·

22、 收件人姓名，地址和電話號碼· 航空：正確的運送名稱（生物制品，B類”）,最小尺寸：方框邊線的寬度至少應為2mm，字母和數(shù)字至少為6mm高。航空運輸時方框每邊至少長為50mm。 顏色：未特別指定，標記于外包裝上最外層，并與底色明顯不同，清晰可讀即可。 水陸運輸（公路、鐵路和海路）：無需其他標記 航空運輸：帖明標記，生物制品，B類”,申請單位,從事疾病預防控制、醫(yī)療、教學、科研、菌（毒）種保藏以及生物制品生

23、產(chǎn)的單位，因工作需要，可以申請運輸高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本。,申請在省、自治區(qū)、直轄市行政區(qū)域內(nèi)運輸,申請在省、自治區(qū)、直轄市行政區(qū)域內(nèi)運輸?shù)模墒?、自治區(qū)、直轄市衛(wèi)生行政部門審批。省級衛(wèi)生行政部門應當在5個工作日內(nèi)做出是否批準的決定；符合法定條件的，頒發(fā)《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本準運證書》;不符合法定條件的，應當出具不予批準的決定并說明理由。,申請跨省、自治區(qū)、直轄市運輸,申請跨省、自治區(qū)、直

24、轄市運輸高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本的，應當將申請材料提交運輸出發(fā)地省級衛(wèi)生行政部門進行初審；對符合要求的，省級衛(wèi)生行政部門應當在3個工作日內(nèi)出具初審意見，并將初審意見和申報材料上報衛(wèi)生部審批。,衛(wèi)生部應當自收到申報材料后3個工作日內(nèi)做出是否批準的決定。符合法定條件的，頒發(fā)《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本準運證書》；不符合法定條件的，應當出具不予批準的決定并說明理由。對于為控制傳染病暴發(fā)、流行或者突發(fā)公共衛(wèi)生事

25、件應急處理的運輸申請，省級衛(wèi)生行政部門與衛(wèi)生部之間可以通過傳真的方式進行上報和審批；需要提交有關(guān)材料原件的，應當于事后盡快補齊。,運輸申請,申請單位在運輸前應當向省級衛(wèi)生行政部門提出申請，并提交以下申請材料（原件一份，復印件三份）,申請材料,可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸申請表；法人資格證明材料（復印件）；接收高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本的單位(以下簡稱接收單位)同意接收的證明文件； 第七條第（二）、（三

26、）項所要求的證明文件（復印件）；容器或包裝材料的批準文號、合格證書（復印件）或者高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸容器或包裝材料承諾書；其它有關(guān)資料。,接收單位應具備的條件,具有法人資格；具備從事高致病性病原微生物實驗活動資格的實驗室；取得有關(guān)政府主管部門核發(fā)的從事高致病性病原微生物實驗活動、菌（毒）種或樣本保藏、生物制品生產(chǎn)等的批準文件。,專人護送,運輸高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本，應當有專人護送，護送人員不得少于兩

27、人。申請單位應當對護送人員進行相關(guān)的生物安全知識培訓。在護送過程中采取相應的防護措施。,運輸后續(xù)工作,《規(guī)定》第十六條 在運輸結(jié)束后，申請單位應當將運輸情況向原批準部門書面報告。,運輸審批流程,附:應城市疾病預防控制中心手足口病樣本采集運送要求,一、手足口病相關(guān)資料手足口病(Hand foot mouth disease, HFMD) 是由腸道病毒引起的傳染病，多發(fā)生于5歲以下的嬰幼兒，可引起發(fā)熱和手、足、口腔等部位的皮疹、潰瘍

28、，個別患者可引起心肌炎、肺水腫、無菌性腦膜腦炎等并發(fā)癥。引發(fā)手足口病的腸道病毒有20多種，其中柯薩奇病毒(Cox Asckievirus) A16 型(Cox A16) 和腸道病毒71型（Enterovirus71.EV 71）最常見。從有關(guān)資料表明，HFMD的病原體經(jīng)歷了較大的變遷。對藥物具有抗性， 75％酒精，5％來蘇對腸道病毒沒有作用，對乙醚，去氯膽酸鹽等不敏感。但對紫外線及干燥敏感，各種氧化劑(高錳酸鉀、漂白粉等)、甲醛、碘酒

29、都能滅活。病毒在50 ℃可被迅速滅活，但1mol濃度二價陽離子環(huán)境可提高病毒對熱滅活的抵抗力，病毒在4 ℃可存活1年，在- 20 ℃可長期保存，在外環(huán)境中病毒可長期存活。,二、標本采集對象,標本采集對象是暴發(fā)疫情出現(xiàn)時手足口病的臨床診斷病例和病例發(fā)病所在社區(qū)（村）的臨近無病例的社區(qū)（村）或托幼機構(gòu)的5歲以下的兒童（作為健康對照人群）。用于病毒分離的標本包括糞便、咽拭子和皰疹液，如果患者出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，可以采集腦脊液標本。對于血清學診

30、斷，需要在急性期和恢復期采集雙份血清標本。臨床標本在運輸和貯存過程中要避免反復凍融，如果不能確保-20℃的條件，應該在0~8℃運輸和保存。標本應冷凍運輸，運輸時要附有必要的信息，如標本編號、發(fā)病日期和標本采集日期。,三、標本種類及采集、運送,（一）糞便標本采集病人發(fā)病7日內(nèi)的糞便標本，用于病原檢測。糞便標本采集量5~8g/份，采集后立即放入無菌采便管內(nèi)，4℃暫存立即(12h內(nèi))送達實驗室，－20℃以下低溫冷凍保藏，需長期保存的標本存于

31、－70℃冰箱。（二）咽拭子標本采集病人發(fā)病3日內(nèi)的咽拭子標本，用于病原檢測。用專用采樣棉簽，適度用力拭抹咽后壁和兩側(cè)扁桃體部位，應避免觸及舌部；迅速將棉簽放入裝有3~5ml保存液（維持液或生理鹽水，推薦使用維持液）的采樣管中，在靠近頂端處折斷棉簽桿，旋緊管蓋并密封，以防干燥。4℃暫存立即（12h內(nèi)）送達實驗室，－20℃以下低溫冷凍保藏，需長期保存的標本存于－70℃冰箱。,（三）血清標本采集急性期（發(fā)病0~3d）和恢復期（發(fā)病14~

32、30d）雙份配對血清用于抗體檢測。靜脈采集3~5ml全血，置于真空無菌采血管中，自凝后，分離血清，將血清置于－20℃以下冰箱中冷凍保存。（四）皰疹液在手足口病的實驗室診斷中，從皰疹液中分離到病毒具有很高的診斷價值，可同時采集多個皰疹作為一份標本。先用75%的酒精對皰疹周圍的皮膚進行消毒，然后用消毒針將皰疹挑破用棉簽蘸取皰疹液，迅速將棉簽放入內(nèi)裝有3~5ml保存液（維持液或生理鹽水，推薦使用維持液）的采樣管中，在靠近頂端處折斷棉簽桿，

33、旋緊管蓋并密封。所采集標本4℃暫存立即（12h內(nèi)）送達實驗室，－20℃以下低溫冷凍保藏，需長期保存的標本存于－70℃冰箱。,（五）腦脊液標本出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀的病例，要采集腦脊液標本，進行病原和抗體檢測，從腦脊液中分離病毒也具有很高的診斷價值。采集時間為出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀后3天內(nèi)，采集量為1.0~2.0ml。采集后立即裝入無菌帶墊圈的凍存管中，4℃暫存立即(12h內(nèi))送達實驗室，－20℃以下低溫冷凍保藏，需長期保存的標本存于－70℃冰箱。

34、（六）病例密切接觸者的標本采集選擇典型病例所在的托幼機構(gòu)、或所在村，以新發(fā)病例密切接觸者為采樣對象，采集單份糞便和血清標本。（七）健康對照的標本采集選擇患兒發(fā)病所在社區(qū)（村）的臨近無病例的社區(qū)（村）或托幼機構(gòu)。采集5歲以下的兒童單份糞便和血清標本。,三、標本采集注意事項,在手足口病的實驗室診斷中，從皰疹液或腦脊液中分離病毒具有很高的診斷價值，但對于不同血清型的腸道病毒，腦脊液中的病毒分離率是大不相同的。用于采集咽拭子的無菌拭子要