燒傷及綠膿桿菌對(duì)局部淋巴免疫功能的影響.pdf

1、目的： 嚴(yán)重?zé)齻瑢⒁饳C(jī)體免疫功能紊亂，主要表現(xiàn)為免疫抑制，燒傷免疫抑制使病人發(fā)生嚴(yán)重感染、多器官功能障礙綜合癥(MODS)的幾率增加。大量的實(shí)驗(yàn)詳細(xì)的闡述了免疫抑制的機(jī)制，其中包括外周血中T淋巴細(xì)胞免疫功能障礙、巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥介質(zhì)變化和Th1/Th2功能性極化向Th2方向的漂移等。然而，這些研究僅僅揭示了燒傷后系統(tǒng)免疫功能的變化，而有燒傷引起的局部免疫功能變化知之甚少。 本實(shí)驗(yàn)的目的在于通過檢測大鼠燒傷創(chuàng)面引流淋

2、巴液內(nèi)TNF-α、IFN-γ、IL-4水平和IFN-γ/IL-4比值變化，以及燒傷創(chuàng)面引流淋巴結(jié)內(nèi)CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞比例和CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值變化來探討燒傷對(duì)局部免疫功能的影響。 方法： 24只清潔級(jí)成年雄性wistar大鼠，3﹪戊巴比妥鈉(40mg/kg)腹腔內(nèi)注射麻醉，麻醉成功后，單側(cè)后腿(隨機(jī))浸于70℃熱水30秒，造成單側(cè)后腿4﹪TBSA深I(lǐng)I度燙傷，對(duì)側(cè)后腿浸于22℃熱水30秒，分為燒傷腿

3、組(A組)和對(duì)側(cè)未燒傷腿組(B組)，燙傷后給予頭孢哌酮腹腔注射以防止感染(40mg/kg/day)。術(shù)后將大鼠單獨(dú)置于放有無菌布單的大鼠飼養(yǎng)籠中，大鼠清醒后即可自由飲食。實(shí)驗(yàn)分為3個(gè)時(shí)間點(diǎn)：燒傷后6小時(shí)(6只)、燒傷后24小時(shí)(6只)、燒傷后72小時(shí)(6只)。C組(6只)為假燙傷組，未接受任何處理。標(biāo)本收集方法如下：麻醉成功后，刮除腹部毛發(fā)，沿腹部正中做切口，長約5厘米，先把腸管翻向左側(cè)，在右下腹腔即可看到右髂總淋巴結(jié)，在手術(shù)顯微鏡下仔

4、細(xì)分離右髂總淋巴結(jié)的輸出淋巴管，游離出大約1.5～2厘米，用3-0絲線結(jié)扎其上端，對(duì)側(cè)接受同樣的處理。將大鼠雙側(cè)后腿按摩約30分鐘，使淋巴管充盈，用針頭(直徑0.45mm)插入充盈的淋巴管，抽出淋巴液約40μl，將淋巴液置于Eppendorf管中，加入肝素(終濃度20IU/ml)以防止其凝固，將淋巴液立即置于離心機(jī)離心(600轉(zhuǎn)/分鐘)10分鐘，取其上清，即淋巴漿，將淋巴漿置于-80℃超低溫冰箱待測。在取完淋巴液后，隨后收集髂總淋巴結(jié)。

5、應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbent assay， ELISA)檢測淋巴液內(nèi)TNF-α、IFN-γ、IL-4水平，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測淋巴結(jié)內(nèi)CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞比例。 結(jié)果： 燒傷后6、24和72小時(shí)，TNF-α水平，A組顯著高于B組(51.62±5.36對(duì)17、84±1.58 p<0.01，27.35±2.57對(duì)16.44±1.21 p<0.01，23.04±2.67對(duì)17.

6、24±2.05 p<0.05，pg/ml)。燒傷后6、24和72小時(shí)，IFN-γ水平，A、B兩組間比較差異無顯著性。燒傷后6、24和72小時(shí)，IL-4水平，A組顯著高于B組(14.15±1.08對(duì)8.97±0.72 p<0.05，19.76±2.15對(duì)9.37±0.78 p<0.05，14.37±1.73對(duì)8.80±1.24 p<0.01，pg/ml)。燒傷后6、24和72小時(shí)一IFN-γ/IL-4比值，A組顯著低于B組(2.27±0.

7、34對(duì)3.33±0.25 p<0.05，1.54±0.19對(duì)3.34±0.22 p<0.05，1.60±0.16對(duì)2.52±0.24，p<0.01)。燒傷后6和24小時(shí)，CD4+T淋巴細(xì)胞比例，A、B兩組間比較差異無顯著性(45.78±2.97﹪對(duì)48.90±2.39﹪，43.42±1.50﹪對(duì)46.05±3.27﹪，p>0.05)，而燒傷后72小時(shí)，A組顯著低于B組(38.55±2.26﹪對(duì)48.87±2.90﹪，p<0.05)。燒傷

8、后6、24和72小時(shí)，CD8+T淋巴細(xì)胞比例，A、B兩組間比較差異無顯著性(17.67±0.39﹪對(duì) 18.26±0.48﹪， 18.31±1.12﹪對(duì) 19.00±0.74﹪，18.28±0.57﹪對(duì)17.95±0.74﹪，p>0.05)。燒傷后6和24小時(shí)，CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值，A、B 兩組間比較差異無顯著性(2.58±0.14對(duì)2.72±0.19，2.41±0.16對(duì)2.42±0.15，p>0.05)，而燒傷后72小時(shí)

9、，A組顯著低于B組(2.13±0.16對(duì)2.68±0.12，p<0.05)。 結(jié)論： 1、燒傷能夠引起局部引流淋巴液的TNF-α水平升高。 2、燒傷能夠引起局部引流淋巴液IL-4水平升高，從而降低引流淋巴液IFN-γ/IL-4(Th1/Th2細(xì)胞因子)比值，抑制局部免疫功能。 3、燒傷能夠引起局部引流淋巴結(jié)內(nèi)CD4+T淋巴細(xì)胞比例降低，從而降低引流淋巴結(jié)內(nèi)CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值，抑制局部免疫功能