綠膿桿菌及其小分子產(chǎn)物誘導(dǎo)人呼吸道炎癥反應(yīng)機(jī)制研究.pdf

1、本項(xiàng)研究目的是探討綠膿桿菌及其分泌的小分子產(chǎn)物綠膿菌素對(duì)呼吸道上皮細(xì)胞IL-8表達(dá)的影響及其胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)通路.首先,我們使用綠膿桿菌培養(yǎng)上清刺激原代培養(yǎng)氣管上皮細(xì)胞及呼吸道上皮細(xì)胞株A549和SPC-A-1,均檢測(cè)到IL-8的分泌顯著增高;用氯仿抽提去除培養(yǎng)上清的綠膿菌素后,再用分子截留量為3kD的濾膜過(guò)濾所得的超濾液刺激上皮細(xì)胞發(fā)現(xiàn)有新的未知小分子物質(zhì)也可誘導(dǎo)細(xì)胞IL-8的上調(diào)表達(dá).綠膿菌素是綠膿桿菌分泌的一類(lèi)重要毒力因子.從化合物衍

2、生的和培養(yǎng)上清提取的綠膿菌素刺激原代培養(yǎng)氣管上皮細(xì)胞對(duì)IL-8的表達(dá)沒(méi)有顯著影響,刺激A549和SPC-A-1細(xì)胞則可誘導(dǎo)IL-8的增強(qiáng)表達(dá).其次,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),用綠膿菌素刺激細(xì)胞后,MAPK及NF-κB這兩條通路同時(shí)被激活.我們使用Western Blot方法觀察綠膿菌素刺激呼吸道上皮細(xì)胞后胞內(nèi)MAPK通路的信號(hào)分子的動(dòng)態(tài)變化,提供了綠膿菌素可刺激細(xì)胞內(nèi)MAPKs蛋白分子ERK1/2、p38 MAPK和JNK發(fā)生磷酸化的直接證據(jù),并通過(guò)使

3、用MAPKs抑制劑U0126和SB203580,證實(shí)MAPKs信號(hào)傳導(dǎo)通路參與了綠膿菌素誘導(dǎo)呼吸道上皮細(xì)胞IL-8的表達(dá).對(duì)NF-κB信號(hào)通路的重要分子lkB-α的研究,首次發(fā)現(xiàn)綠膿菌素可使IκB-α發(fā)生降解.使用酪氨酸蛋白激酶抑制劑genistein預(yù)處理A549細(xì)胞,也可降低綠膿菌素誘導(dǎo)的IL-8表達(dá).由于Toll樣受體(TLRs)在調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)中具有重要的作用,我們進(jìn)一步探討了TLR介導(dǎo)的信號(hào)通路與A549細(xì)胞IL-8刺激表達(dá)