乳酸菌培養(yǎng)及誘導(dǎo)培養(yǎng)基

1、嗜酸乳桿菌嗜酸乳桿菌試驗(yàn)方法試驗(yàn)方法一株嗜酸乳桿菌產(chǎn)共軛亞油酸條件的優(yōu)化[J].中國釀造，20091、基礎(chǔ)培養(yǎng)基(脫脂乳培養(yǎng)基)12.0g脫脂奶粉，蒸餾水100mL，pH自然，115℃滅菌20min。2、MRS固體培養(yǎng)基葡萄糖20.0g，蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母浸膏5.0g，無水乙酸鈉5.0g，磷酸氫二鉀2.0g，檸檬酸氫二銨2.0g，MgSO47H2O0.58g，MnSO4H2O0.33g，瓊脂15g，pH6.8左右，

2、加蒸餾水至1000mL，121℃滅菌20min。3、產(chǎn)酶培養(yǎng)基：脫脂乳培養(yǎng)基，并加入一定濃度的亞油酸來誘導(dǎo)產(chǎn)酶。1出發(fā)菌株的活化及純化出發(fā)菌株的活化及純化保藏的嗜酸乳桿菌接種于液體MRS培養(yǎng)基，搖勻后置36℃恒溫箱中培養(yǎng)12h，接種于液體培養(yǎng)基中活化2次。劃線接種到MRS固體培養(yǎng)基，36℃恒溫培養(yǎng)36h，嗜酸乳桿菌在120r／min的狀態(tài)下培養(yǎng)有利于嗜酸乳桿菌的繁殖。長出單個(gè)菌落后，挑取菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢，確定是否純種。嗜酸乳桿菌的

3、形態(tài)與菌落特征在MRS瓊脂培養(yǎng)基上需氧培養(yǎng)48h后，菌落微小，不規(guī)則，微隆起，有光澤，灰白色，呈透明的玻璃霜花樣。10倍顯微鏡觀察表面凸凹不平，邊緣為絲狀或卷發(fā)樣。革蘭氏染色后可見菌體呈短桿狀，單個(gè)或短鏈狀排列，革蘭氏染色陽性。肉眼觀察，嗜酸乳桿菌菌落較小平臺(tái)狀，不規(guī)則、圓形凸起、邊緣整齊、質(zhì)地柔軟、灰白色、有光澤。1）500mLMRS液體培養(yǎng)基2）5個(gè)250mL的三角瓶，橡膠塞，牛皮紙，繩子3）5個(gè)培養(yǎng)皿4）1個(gè)接種環(huán)，酒精燈，打火機(jī)

4、，酒精2種子的制備種子的制備活化的菌種接種于基礎(chǔ)培養(yǎng)基，于36℃恒溫培養(yǎng)24h，保藏備用。增菌培養(yǎng)基最佳接種量為3%（活菌數(shù)為108個(gè)mL）★3產(chǎn)酶誘導(dǎo)培養(yǎng)產(chǎn)酶誘導(dǎo)培養(yǎng)用脫脂乳配成12%的產(chǎn)酶液體培養(yǎng)基，每250mL三角瓶中裝入100mL(含12g脫脂乳、1.50‰亞油酸)，加入1mL吐溫80，115℃滅菌30min后，接入2mL種子液(每mL含菌體5108個(gè))，36℃培養(yǎng)36h。▲5共軛亞油酸的檢測(cè)脂肪酸的提取反應(yīng)后的溶液中加入5ml

5、正己烷，充分震蕩萃取，靜置后待分層，收集上清液，在正己烷溶液中加如無水NH3SO4吸水干燥。與30℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，去除有機(jī)溶劑，將余下的液體收集在試管中待測(cè)。GCMS檢測(cè)共軛亞油酸以未接入菌種、其他步驟和條件同上的情況下所得到的正己烷萃取液為參比、正己烷為溶劑，于波長200nm～300nm處掃描樣品，觀察波長233nm處有無特征吸收峰。若在該波長處有特征吸收峰者，表明其發(fā)酵液中有CLA生成，讀取波長234nm處吸光度值，根據(jù)CLA標(biāo)準(zhǔn)曲線所

6、得CLA濃度，計(jì)算發(fā)酵液中CLA的生成量。用UV1600可見紫外分光光度計(jì)在190nm～300nm對(duì)共軛亞油酸進(jìn)行波長掃描，以確定其最大的吸收波長。其波長掃描圖如圖2.1，得其最大吸收波長233nm。圖2.1CLA最大吸收波長掃描圖Fig.2.1AbsptionwavemaximumofCLA張智，余萍.嗜酸乳桿菌的篩選及培養(yǎng)基的優(yōu)化[J].中國乳品工業(yè)200735(6)：25～27.★陳洪儀，楊楠.嗜酸乳桿菌培養(yǎng)的研究[J].現(xiàn)代食品