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1、嗜酸乳桿菌嗜酸乳桿菌試驗(yàn)方法試驗(yàn)方法一株嗜酸乳桿菌產(chǎn)共軛亞油酸條件的優(yōu)化[J].中國釀造,20091、基礎(chǔ)培養(yǎng)基(脫脂乳培養(yǎng)基)12.0g脫脂奶粉,蒸餾水100mL,pH自然,115℃滅菌20min。2、MRS固體培養(yǎng)基葡萄糖20.0g,蛋白胨10.0g,牛肉膏10.0g,酵母浸膏5.0g,無水乙酸鈉5.0g,磷酸氫二鉀2.0g,檸檬酸氫二銨2.0g,MgSO47H2O0.58g,MnSO4H2O0.33g,瓊脂15g,pH6.8左右,
2、加蒸餾水至1000mL,121℃滅菌20min。3、產(chǎn)酶培養(yǎng)基:脫脂乳培養(yǎng)基,并加入一定濃度的亞油酸來誘導(dǎo)產(chǎn)酶。1出發(fā)菌株的活化及純化出發(fā)菌株的活化及純化保藏的嗜酸乳桿菌接種于液體MRS培養(yǎng)基,搖勻后置36℃恒溫箱中培養(yǎng)12h,接種于液體培養(yǎng)基中活化2次。劃線接種到MRS固體培養(yǎng)基,36℃恒溫培養(yǎng)36h,嗜酸乳桿菌在120r/min的狀態(tài)下培養(yǎng)有利于嗜酸乳桿菌的繁殖。長出單個(gè)菌落后,挑取菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢,確定是否純種。嗜酸乳桿菌的
3、形態(tài)與菌落特征在MRS瓊脂培養(yǎng)基上需氧培養(yǎng)48h后,菌落微小,不規(guī)則,微隆起,有光澤,灰白色,呈透明的玻璃霜花樣。10倍顯微鏡觀察表面凸凹不平,邊緣為絲狀或卷發(fā)樣。革蘭氏染色后可見菌體呈短桿狀,單個(gè)或短鏈狀排列,革蘭氏染色陽性。肉眼觀察,嗜酸乳桿菌菌落較小平臺(tái)狀,不規(guī)則、圓形凸起、邊緣整齊、質(zhì)地柔軟、灰白色、有光澤。1)500mLMRS液體培養(yǎng)基2)5個(gè)250mL的三角瓶,橡膠塞,牛皮紙,繩子3)5個(gè)培養(yǎng)皿4)1個(gè)接種環(huán),酒精燈,打火機(jī)
4、,酒精2種子的制備種子的制備活化的菌種接種于基礎(chǔ)培養(yǎng)基,于36℃恒溫培養(yǎng)24h,保藏備用。增菌培養(yǎng)基最佳接種量為3%(活菌數(shù)為108個(gè)mL)★3產(chǎn)酶誘導(dǎo)培養(yǎng)產(chǎn)酶誘導(dǎo)培養(yǎng)用脫脂乳配成12%的產(chǎn)酶液體培養(yǎng)基,每250mL三角瓶中裝入100mL(含12g脫脂乳、1.50‰亞油酸),加入1mL吐溫80,115℃滅菌30min后,接入2mL種子液(每mL含菌體5108個(gè)),36℃培養(yǎng)36h。▲5共軛亞油酸的檢測(cè)脂肪酸的提取反應(yīng)后的溶液中加入5ml
5、正己烷,充分震蕩萃取,靜置后待分層,收集上清液,在正己烷溶液中加如無水NH3SO4吸水干燥。與30℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā),去除有機(jī)溶劑,將余下的液體收集在試管中待測(cè)。GCMS檢測(cè)共軛亞油酸以未接入菌種、其他步驟和條件同上的情況下所得到的正己烷萃取液為參比、正己烷為溶劑,于波長200nm~300nm處掃描樣品,觀察波長233nm處有無特征吸收峰。若在該波長處有特征吸收峰者,表明其發(fā)酵液中有CLA生成,讀取波長234nm處吸光度值,根據(jù)CLA標(biāo)準(zhǔn)曲線所
6、得CLA濃度,計(jì)算發(fā)酵液中CLA的生成量。用UV1600可見紫外分光光度計(jì)在190nm~300nm對(duì)共軛亞油酸進(jìn)行波長掃描,以確定其最大的吸收波長。其波長掃描圖如圖2.1,得其最大吸收波長233nm。圖2.1CLA最大吸收波長掃描圖Fig.2.1AbsptionwavemaximumofCLA張智,余萍.嗜酸乳桿菌的篩選及培養(yǎng)基的優(yōu)化[J].中國乳品工業(yè)200735(6):25~27.★陳洪儀,楊楠.嗜酸乳桿菌培養(yǎng)的研究[J].現(xiàn)代食品
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