糧食中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮的污染調(diào)查及降解毒素微生物的篩選.pdf

1、真菌毒素是真菌在生長(zhǎng)過(guò)程中產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物。其在影響農(nóng)作物營(yíng)養(yǎng)和經(jīng)濟(jì)價(jià)值的同時(shí)也給人類(lèi)健康帶來(lái)潛在威脅。脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)和玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)作為鐮刀霉毒素的代表,廣泛存在于世界各地的谷物及其副產(chǎn)物當(dāng)中。傳統(tǒng)物理、化學(xué)方法清除DON和ZEN存在著降解不徹底、破壞營(yíng)養(yǎng)的缺點(diǎn),通過(guò)微生物代謝作用將毒素降解為無(wú)毒產(chǎn)物是目前研究的熱點(diǎn)。了解糧食原料的污染情況,篩選分離降解毒素

2、的微生物是實(shí)現(xiàn)真菌毒素有效控制的重要內(nèi)容,為此,本文進(jìn)行了較為詳盡的研究。
　　 為了深入了解安徽和河南省糧食中DON和ZEN的污染水平,本研究對(duì)2008年安徽及河南部分縣市的玉米、小麥樣品中DON和ZEN的含量進(jìn)行了調(diào)查研究。以玉米、小麥為材料,分別采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和高效液相色譜法(HPLC)檢測(cè)了脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)和玉米赤霉烯酮(ZEN)的含量,采用SPSS軟件對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　

3、 為獲取降解毒素的微生物,本研究采用了兩種策略:1.以毒素為唯一碳源,以污染毒素的玉米、小麥、土壤樣品中的原籍微生物為候選對(duì)象；2.用毒素DON飼喂家雞和BALB/C小鼠,造成其腸道的毒素污染,從而在選擇壓力下篩選清除DON的微生物。結(jié)果表明:測(cè)試玉米、小麥和土壤樣品中未篩選到清除DON的菌株,而從土壤和玉米樣品中發(fā)現(xiàn)6株單菌具有清除ZEN的能力,最高清除率達(dá)到75.5％。
　　 為了準(zhǔn)確了解清除菌株的歸屬,本文采用PCR擴(kuò)增

4、16S rDNA序列、Genebank數(shù)據(jù)庫(kù)中同源性搜索和比對(duì)的方法,確定了6株ZEN清除菌分屬于鼠李糖短桿菌(Brachybacterium rhamnosum)、羅爾斯通氏貪銅菌(Ralstonia metallidurans)、糞腸球菌(Enterococcus faecalis)、蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)、藤黃微球菌(Micrococcus luteus)、洋蔥伯克霍爾德菌(Burkholderia cep

5、acia),通過(guò)形態(tài)觀(guān)察、生理生化反應(yīng)初步了解了6株菌的形態(tài)和理化特征。
　　 為進(jìn)一步提高降解菌株清除毒素的能力,本文以蠟樣芽胞桿菌和藤黃微球菌為試驗(yàn)對(duì)象,通過(guò)培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)基、起始pH、培養(yǎng)轉(zhuǎn)速、碳源的優(yōu)化實(shí)驗(yàn),確定了兩者最佳的ZEN清除條件。蠟樣芽胞桿菌:BA液體培養(yǎng)基,初始pH為6.5,轉(zhuǎn)速180 rpm,37℃培養(yǎng)120 h可以清除培養(yǎng)基中100％的ZEN。藤黃微球菌:LB液體培養(yǎng)基,初始pH為7.0,轉(zhuǎn)速1