怎樣進(jìn)行一個(gè)菌種的保藏

1、1、怎樣進(jìn)行一個(gè)菌種的保藏、擴(kuò)繁以及防止退化措施（一）菌種的保藏微生物具有容易變異的特性，因此，在保藏過(guò)程中，必須使微生物的代謝處于最不活躍或相對(duì)靜止的狀態(tài)，才能在一定的時(shí)間內(nèi)使其不發(fā)生變異而又保持生活能力。低溫、干燥和隔絕空氣是使微生物代謝能力降低的重要因素，所以，菌種保藏方法雖多，但都是根據(jù)這三個(gè)因素而設(shè)計(jì)的。1、傳代培養(yǎng)保藏法又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等（后者作保藏厭氧細(xì)菌用），培養(yǎng)后于4—6℃冰箱內(nèi)保存。1.1斜面低

2、溫保藏法將菌種接種在適宜的固體斜面培養(yǎng)基上，待菌充分生長(zhǎng)后，棉塞部分用油紙包扎好，移至2—8℃的冰箱中保藏。保藏時(shí)間依微生物的種類而有不同，霉菌、放線菌及有芽孢的細(xì)菌保存2—4個(gè)月，移種一次。酵母菌兩個(gè)月，細(xì)菌最好每月移種一次。此法為實(shí)驗(yàn)室和工廠菌種室常用的保藏法，優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單，使用方便，不需特殊設(shè)備，能隨時(shí)檢查所保藏的菌株是否死亡、變異與污染雜菌等。缺點(diǎn)是容易變異，因?yàn)榕囵B(yǎng)基的物理、化學(xué)特性不是嚴(yán)格恒定的，屢次傳代會(huì)使微生物的代謝改

3、變，而影響微生物的性狀；污染雜菌的機(jī)會(huì)亦較多。1.2穿刺培養(yǎng)用接種針拉直了挑菌直接穿到培養(yǎng)基的底層培養(yǎng)，用于厭氧性或兼性厭氧性細(xì)菌的培養(yǎng)。2、液體石蠟覆蓋保藏法是傳代培養(yǎng)的變相方法，能夠適當(dāng)延長(zhǎng)保藏時(shí)間，它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋滅菌的液體石蠟，一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡，另一方面可阻止氧氣進(jìn)入，以減弱代謝作用。3、載體保藏法是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進(jìn)行干燥的保藏法，例如沙土

4、保藏法和濾紙保藏法應(yīng)用相當(dāng)廣泛。4、寄主保藏法度等條件，選擇最佳培養(yǎng)條件。3.1幾種深層培養(yǎng)法①控制培養(yǎng)法根據(jù)罐內(nèi)部的變化情況，掌握短暫時(shí)間內(nèi)狀態(tài)變量的變化以及可能測(cè)定的環(huán)境因子對(duì)微生物代謝活動(dòng)的影響，并以此為基礎(chǔ)進(jìn)行控制培養(yǎng)，以達(dá)到產(chǎn)物的最優(yōu)培養(yǎng)條件。為此，用測(cè)定狀態(tài)變量的傳感器取得數(shù)據(jù)，經(jīng)電子計(jì)算機(jī)進(jìn)行綜合分析，再將其結(jié)果作為反饋調(diào)節(jié)的信號(hào)，將環(huán)境(培養(yǎng)條件)控制于給定的基準(zhǔn)內(nèi)。這就叫做電子計(jì)算機(jī)控制培養(yǎng)。目前已大量用于露天大罐啤酒

5、發(fā)酵。②載體培養(yǎng)法載體培養(yǎng)法脫胎于曲法培養(yǎng)，同時(shí)又吸收了液體培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)，是近年來(lái)新發(fā)展的一種培養(yǎng)方法。特征是以天然或人工合成的多孔材料代替麩皮之類的固體基質(zhì)作為微生物的載體，營(yíng)養(yǎng)成分可以嚴(yán)格控制。發(fā)酵結(jié)束，只要將菌體和培養(yǎng)基擠壓出來(lái)進(jìn)行抽提，載體又可以重新使用。③兩步法在酶制劑的兩步法液體深層培養(yǎng)中，每一步菌體相同而培養(yǎng)條件不同，因?yàn)槲⑸锷L(zhǎng)與產(chǎn)酶的最適條件有很大的差異。例如往培養(yǎng)基中添加葡萄糖能大大增加菌體或菌絲的生長(zhǎng)，然而卻嚴(yán)重阻

6、礙許多種酶的合成。加強(qiáng)培養(yǎng)液的通氣雖然能促進(jìn)微生物的生長(zhǎng)，可是在多數(shù)場(chǎng)合下反而抑制酶的合成。為了取得最大的高活力酶，必須制定一種調(diào)節(jié)方法，既要求細(xì)胞的單位酶活力高，又要求細(xì)胞數(shù)量多，也就是說(shuō)，給菌體在各種生理時(shí)期創(chuàng)造不同的條件。兩步法液體深層培養(yǎng)就是實(shí)現(xiàn)這種調(diào)節(jié)的具體措施之一。酶制劑生產(chǎn)兩步法的特點(diǎn)是將菌體生長(zhǎng)條件(生長(zhǎng)期)與產(chǎn)酶條件(生產(chǎn)期)區(qū)分開(kāi)來(lái)。菌體先在豐富的培養(yǎng)基上大量繁殖，然后收集菌體濃縮物，洗滌后再轉(zhuǎn)入添加誘導(dǎo)物的產(chǎn)酶培養(yǎng)

7、基，在此期間，菌體積累大量的酶，一般不再繁殖，營(yíng)養(yǎng)成分或誘導(dǎo)物得到充分的利用。（三）菌種防止退化措施要防止菌種衰退，應(yīng)該作好保藏工作，使菌種優(yōu)良的特性得以保存，盡量減少傳代次數(shù)。⑴菌種的分離菌種發(fā)生衰退的同時(shí)，并不是所有的菌種都衰退，其中未衰退的菌體往往是經(jīng)過(guò)環(huán)境條件考驗(yàn)的、具有更強(qiáng)生命力的菌體。因此，采用單細(xì)胞菌株分離的措施，即用稀釋平板法或用平板劃線法，以取得單細(xì)胞所長(zhǎng)成的菌落，再通過(guò)菌落和菌體的特征分析和性能測(cè)定，就可獲得具有原來(lái)