柴油尾氣污染物誘導(dǎo)豚鼠咳嗽高敏感性及其氣道炎癥探討.pdf

1、機(jī)動(dòng)車(chē)尾氣排放是我國(guó)大城市空氣污染的重要來(lái)源，PM2.5是重要的空氣污染物。在交通相關(guān)空氣污染物中，PM2.5主要來(lái)源于柴油機(jī)動(dòng)車(chē)排放的廢氣。流行病學(xué)研究表明，交通相關(guān)空氣污染與咳嗽的患病率密切相關(guān)。研究證實(shí)，迷走神經(jīng)/氣道的T RPA1能被柴油尾氣等空氣污染物激活，從而引起一系列呼吸道疾病。然而空氣污染物誘發(fā)咳嗽的機(jī)制尚未明確，空氣污染物與咳嗽敏感性的關(guān)系亦鮮有報(bào)道。本課題組前期進(jìn)行了室外的豚鼠暴露實(shí)驗(yàn)，證實(shí)交通相關(guān)空氣污染能誘發(fā)豚鼠

2、咳嗽敏感性增高。然而，室外暴露存在較多干擾因素，暴露環(huán)境不可控、不穩(wěn)定。因此，有必要構(gòu)建可控的、穩(wěn)定的室內(nèi)污染物暴露實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步探討空氣污染物與咳嗽敏感性的關(guān)系。
　　因而，本研究通過(guò)構(gòu)建可控的、穩(wěn)定的柴油尾氣室內(nèi)暴露環(huán)境，觀察柴油尾氣污染物與豚鼠咳嗽敏感性的關(guān)系，探討T RPA1在柴油尾氣污染物影響豚鼠咳嗽敏感性當(dāng)中的作用。
　　目的：
　　構(gòu)建可控、穩(wěn)定的柴油尾氣室內(nèi)暴露誘導(dǎo)的豚鼠咳嗽高敏感模型并探討其機(jī)制。

3、>　　方法：
　　1、動(dòng)物分組：分為對(duì)照組、低濃度尾氣暴露組、高濃度尾氣暴露組、低濃度尾氣暴露+HC-030031組、高濃度尾氣暴露+HC-030031組。
　　2、構(gòu)建室內(nèi)暴露環(huán)境：暴露組豚鼠放置于柴油尾氣暴露室內(nèi)進(jìn)行暴露，每天3小時(shí)，連續(xù)14天。低濃度暴露組和低濃度尾氣暴露+HC-030031組以PM2.5濃度為200μg/m3作為目標(biāo)濃度，高濃度暴露組和高濃度尾氣暴露+HC-030031組以PM2.5濃度為1000μg

4、/m3作為目標(biāo)濃度。對(duì)照組豚鼠飼養(yǎng)于相對(duì)潔凈的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房。
　　3、藥物干預(yù)：低濃度尾氣暴露+HC-030031組和高濃度尾氣暴露+HC-030031組的每只豚鼠給予TRPA1特異性拮抗劑HC-030031（200 mg/k g，ip）。每天給藥一次，于咳嗽激發(fā)前2h最后一次給藥。其余各組豚鼠不做任何給藥干預(yù)。
　　4、咳嗽激發(fā)試驗(yàn)后12h處理動(dòng)物，留取標(biāo)本，進(jìn)行BALF細(xì)胞總數(shù)計(jì)數(shù)和分類(lèi)計(jì)數(shù)、肺組織形態(tài)學(xué)觀察、ELISA法

5、檢測(cè)肺組織勻漿的P物質(zhì)含量、Western Blot法分別檢測(cè)迷走神經(jīng)節(jié)勻漿和肺組織勻漿的TRPA1含量。
　　結(jié)果：
　　1、柴油尾氣暴露可使豚鼠的咳嗽潛伏期均縮短、咳嗽激發(fā)次數(shù)均增多，該效應(yīng)隨尾氣濃度的增高而愈發(fā)明顯。HC-030031可在一定程度上延長(zhǎng)咳嗽潛伏期、減少咳嗽激發(fā)次數(shù)。
　　2、柴油尾氣暴露后，BALF細(xì)胞總數(shù)增多，且隨尾氣濃度的增高而增多。柴油尾氣暴露可誘導(dǎo)豚鼠產(chǎn)生氣道炎癥，炎癥細(xì)胞以中性粒細(xì)胞和嗜

6、酸性粒細(xì)胞為主，炎癥細(xì)胞比例隨尾氣濃度的增高而增高。HC-030031可使細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞比例下降。
　　3、柴油尾氣暴露后，暴露組肺組織出現(xiàn)不同程度的血管/支氣管周?chē)?、組織水腫和支氣管上皮脫落。HC-030031可在一定程度上抑制該效應(yīng)。
　　4、柴油尾氣暴露后，肺組織SP含量增多，且隨暴露濃度的增高而增多；HC-030031可減少肺組織SP含量。
　　5、柴油尾氣暴露后，肺組織、迷走神經(jīng)節(jié)的TR

7、PA1含量均有不同程度的增多。兩個(gè)迷走神經(jīng)節(jié)中，TRPA1含量增多以頸靜脈神經(jīng)節(jié)為主。HC-030031可減少肺組織、迷走神經(jīng)節(jié)的TRPA1含量。
　　結(jié)論：
　　1、本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建之柴油尾氣室內(nèi)暴露環(huán)境可誘導(dǎo)豚鼠咳嗽敏感性增高，產(chǎn)生氣道炎癥，該暴露方法可控、穩(wěn)定，可作為研究咳嗽高敏感性的一種動(dòng)物模型。
　　2、柴油尾氣污染物可誘導(dǎo)豚鼠產(chǎn)生非特異性氣道炎癥，以中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞增多為主，同時(shí)產(chǎn)生以P物質(zhì)增多的氣道神經(jīng)