革蘭氏陽性無芽胞桿菌

1、第二十一章 革蘭氏陽性無芽胞桿菌第二十二章 G+形成芽孢的細菌李氏桿菌和豬丹毒絲桿菌所引起的疾病是臨床上常見多發(fā)病。前者的代表種為產(chǎn)單核細胞李氏桿菌是一種胞內(nèi)寄生菌，產(chǎn)生溶血素，可用增菌法鑒出。后者是常見的豬病的重要病原性細菌，自然界中分布十分廣泛，明膠穿刺培養(yǎng)成試管刷狀。炭疽桿菌是炭疽的病原，該病有重要的公共衛(wèi)生意義。該菌在形態(tài)上有雙重性，以其莢膜和毒素致病，該菌的微生物學診斷十分重要。致病性梭菌很多，它們在形態(tài)、培

2、養(yǎng)特點、所致疾病方面各有特點，但多以毒力強大的外毒素致病，其中以氣腫疽梭菌、腐敗梭菌、諾維氏梭菌較為重要。,章節(jié)題目：第21章 革藍氏陽性無芽孢桿菌 第22章 革藍氏陽性產(chǎn)芽孢桿菌 目的要求：掌握壞死桿菌、李氏桿菌、豬丹毒絲桿菌和炭疽桿菌的重要特性；重要病原性梭菌的異同點 了解腎桿菌的主要特性 本節(jié)重點：壞死桿菌、李氏桿菌、豬丹毒絲桿菌和炭疽桿菌的重要特性本節(jié)難點：無,第十二章 革蘭氏陽性無芽胞桿菌有3個屬：李

3、氏桿菌屬丹毒絲菌屬腎桿菌屬,第一節(jié) 李氏桿菌屬本屬細菌為G+桿菌需氧或兼性厭氧無芽胞無莢膜20~25℃下能運動37℃不運動,有7個種：產(chǎn)單核細胞李氏桿菌伊氏李氏桿菌韋氏李氏桿菌塞氏李氏桿菌格氏李氏桿菌：不致病莫氏李氏桿菌：不致病,產(chǎn)單核細胞李氏桿菌 一、所致疾病：細胞內(nèi)寄生菌，牛羊易感，小牛、羔羊表現(xiàn)為敗血癥或肝臟壞死 ，成年牛間表現(xiàn)為神經(jīng)癥狀的“轉圈病”，母畜可致流產(chǎn)。孕婦可致流產(chǎn)，兒童出現(xiàn)神經(jīng)癥狀

4、，獸醫(yī)易患皮膚型李氏桿菌病。,產(chǎn)單核細胞李氏桿菌 二、形態(tài)及染色特點：G+規(guī)則的短桿菌，呈“發(fā)渣”狀，兩端鈍圓，有時排列成V型，20-25℃下培養(yǎng)產(chǎn)生4根周身鞭毛，37℃下一根鞭毛，無芽孢，無莢膜。,三、培養(yǎng)及生化特性普通培養(yǎng)基上可生長，但加入血液或血清生長更佳，4℃下可緩慢增殖（特點）。1．血清瓊脂：圓形，光滑透明，淡藍色小菌落。2．血平板：β型狹窄溶血環(huán)。棒狀桿菌和丹毒桿菌為α溶血。,三、培養(yǎng)及生化特性3．肉湯：均勻渾濁

5、，時間久可形成粘稠 沉淀，無菌環(huán)，無菌膜。4．明膠穿刺：沿穿刺線生長，呈倒立樹 木狀，不液化明膠。5．生化特點：發(fā)酵糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，其他具體看書。,四、微生物學診斷1．分離培養(yǎng)及鑒定①取患畜血液，腦組織研磨液，加入50ml胰蛋白胨肉湯中→37℃24h→劃線含有5%綿羊血的胰蛋白胨瓊脂→是否有β溶血及淡藍色小菌落。,四、微生物學診斷1．分離培養(yǎng)及鑒定②挑取特征性菌落作純培養(yǎng)后，用純培養(yǎng)物作以下試驗：染色：G+短桿菌。溶血性檢查

6、：β溶血，20－25℃運動。生化試驗：略③動物致病試驗：肉湯培養(yǎng)物鴿子胸肌注射1ml，豚鼠皮下1ml，2-5d內(nèi)鴿子死亡，豚鼠死亡。,2．血清學檢查：凝集反應。病羊，牛，豬血清凝集價達1∶250~1∶500。馬：1∶1000－1∶2500流產(chǎn)牛：1∶800－1∶1600五、免疫防治1．滅活強毒菌株免疫小鼠產(chǎn)生數(shù)月堅強免疫力。2．免疫能通過淋巴細胞被動轉移，但不能通過血清 被動轉移。,第二節(jié) 丹毒絲菌屬只有1個

7、種，即：豬丹毒絲菌（豬丹毒桿菌）一、所致疾病1．引起3－12月齡豬丹毒，3－4周歲羔羊慢性多發(fā)性關節(jié)炎，雞，火雞衰弱和下痢、鴨的敗血癥并侵害輸卵管。,第二節(jié) 丹毒絲菌屬一、所致疾病2．實驗動物以小鼠和鴿子最易感，家兔和豚鼠抵抗力強。3．人感染后發(fā)生皮膚病變稱“類丹毒”，病狀與人的丹毒病相似，人的丹毒病由化膿性鏈球菌屬致。,豬丹毒病理,一、發(fā)病機理,二、病理變化（如圖）,（一）、急性敗血型,（二）、亞急性疹塊型,（三）、慢性

8、型,1、豬丹毒心內(nèi)膜炎,2、慢性豬丹毒關節(jié)炎,3、皮膚壞死,二、形態(tài)及染色特征G+直或稍彎曲的細桿菌,單在或V形排列在慢性病豬的心內(nèi)膜中呈長絲狀，無莢膜，無芽胞，無鞭毛。,三、培養(yǎng)特性微需O2或兼性厭氧，普通培養(yǎng)基上不生長。1．血平板：濕潤，光滑透明，灰白色露珠樣的圓形小菌落，α溶血（李氏桿菌狹窄的β溶血）。,三、培養(yǎng)特性2．血清肉湯：輕度混濁，有少量白色粘稠沉淀，無菌環(huán)，無菌膜。3．明膠穿刺：沿穿刺線橫向四周生長，如試管刷

9、狀，不液化明膠。4．麥康凱平板：不生長。,四、微生物診斷1．取材：高熱期病豬靜脈采血，死后取心臟，肝、脾，腎，骨髓，淋巴結，涂片染色鏡檢，G+細桿菌，可初步診斷。2．分離培養(yǎng)血平板：露珠狀小菌落，α溶血麥康凱：不生長,3．動物致病性試驗病料制成鹽水乳劑，小鼠皮下0.2ml，鴿子胸肌1ml，豚鼠皮下1ml。結果：小鼠，鴿子，2-5d，死亡，尸體剖檢可分離大量丹毒菌。豚鼠不反應。,4．血清學診斷：凝集反應。（1）玻片法：取標

10、準抗原2滴，1個加病豬血清，另一個加生理鹽水，2min內(nèi)凝集為+。（2）試管法：將血清作1∶50和1∶100釋稀2管，每管1ml，加標準抗原1~2滴。37℃放2-4 h，如1∶50凝集，為陽性。免疫熒光試驗，環(huán)狀沉淀試驗。,五、免疫治療1．本菌有良好免疫原性，應用豬丹毒活菌苗GC42。2．滅活疫苗：三聯(lián)苗（豬瘟，豬丹毒，豬肺疫）。3．抗豬丹毒血清預防及治療。4．青霉素治療。,第三節(jié) 腎桿菌屬鮭腎桿菌：致鮭魚、鱒魚的細菌

11、性腎病，外觀無明顯變化，剖檢可見腎臟的乳白色顆粒肉芽腫病灶。,,,,,,,,本次小節(jié),李氏桿菌和豬丹毒絲桿菌所引起的疾病是臨床上常見多發(fā)病前者的代表種為產(chǎn)單核細胞李氏桿菌,是一種胞內(nèi)寄生菌，產(chǎn)生溶血素，可用增菌法鑒出后者是常見的豬病的重要病原性細菌，自然界中分布十分廣泛，明膠穿刺培養(yǎng)成試管刷狀,第十三章 G+形成芽孢的細菌產(chǎn)芽孢的細菌包括6個屬： 芽孢桿菌屬：引起動物疾病 梭菌屬：引起動物疾病

12、芽孢乳桿菌屬 脫硫腸狀菌屬 芽孢八疊球菌屬 顫螺菌屬,,第一節(jié) 芽孢桿菌屬 本屬種類繁多有34個正式種和24個不正式種，對人畜致病的主要是： 炭疽芽孢桿菌：致炭疽 蠟狀芽孢桿菌：引起食物中毒,一、炭疽芽孢桿菌（一）致病性：能引起人和動物的炭疽病1、牛、綿羊，鹿等最易感：急性敗血癥。2、豬、馬、駱駝、山羊次之：豬表現(xiàn)為慢性咽部局限感染。3、狗、貓食肉獸有相當?shù)挚沽Γ罕憩F(xiàn)為腸炭疽。

13、4、禽類不感染。5、人由于接觸病畜尸體或污染畜產(chǎn)品：引起腸炭疽，肺炭疽，皮膚炭疽。6、死亡家畜通常表現(xiàn)為尸僵不全，血液凝固不良，呈煤焦油狀，天然孔出血。,炭疽病理,一、發(fā)病機理,二、病理變化,（一）、敗血型炭疽（如圖）,（二）、癰型炭疽,1、咽炭疽,（1）、急性咽炭疽,（2）、慢性咽炭疽,2、皮膚炭疽癰,3、腸炭疽癰,4、肺炭疽癰,（二）形態(tài)及染色特征 G+大桿菌，無鞭毛，不運動，芽胞位于菌體中央，直徑不大于菌體，可形成莢膜。

14、 在動物組織或血液中，單在或2—5個菌連接成短鏈，菌體矢直，菌端平截而呈“竹節(jié)狀”，圍繞以豐厚的莢膜，莢膜抗腐敗能力強，菌體因腐敗而消失后，莢膜仍可殘留稱為“菌影”。 組織中的菌體只有遇到游離氧時，才形成芽孢。所以懷疑為炭疽病時，嚴禁剖檢，避免與O2接觸，耳尖采血涂片。 在培養(yǎng)基中，形成長鏈，在普通培養(yǎng)基上不形成莢膜，并于培養(yǎng)18－24h開始形成芽孢。,,,,,,,,,體內(nèi)炭疽桿菌,體外炭疽桿菌,（三）培養(yǎng)特性需氧兼性厭氧

15、，營養(yǎng)要求不高。1．普通培養(yǎng)基上：強毒株形成灰白色不透明，大而扁平，表面干燥，邊緣呈卷發(fā)狀的粗糙菌落（R）；弱毒株形成小而隆起，光滑濕潤，邊緣整齊的S型菌落。2．血平板：不溶血（類炭疽呈β溶血）3．普通肉湯：上部清朗，底部有絮狀沉淀，無菌環(huán)和菌膜，輕搖試管，沉淀物徐徐上升，纏繞成團而不散開。,,,,,,,,,培養(yǎng)特點,（三）培養(yǎng)特性4．明膠穿刺：沿穿刺線緩慢液化，形成倒立的松樹狀。5．青霉素串珠試驗：在含有0.5單位/ml

16、的青霉素培養(yǎng)基中培養(yǎng)時，由于細胞壁中粘肽合成受到抑制，因而形成原生質(zhì)體相互連接成串稱為“串珠反應”，這是該菌特有的反應。,（四）生化特性糖發(fā)酵：G+ 蔗+ 麥+ 菊+ 蕈糖+ 果糖+ 甘油+ 伯膠糖－ 木－甘露醇－淀粉+ 硝酸鹽還原+ 吲哚－ H2S－ H2O2+ （五）抵抗力1．繁殖體的抵抗力不強：60℃ 30－60min殺死75℃ 5－15min殺死。一般消毒

17、劑短時間內(nèi)可將其殺死，未剖檢的尸體，細菌隨腐敗而迅速死亡。2．芽胞抵抗力特強：干燥狀態(tài)下存活10年，土壤中20－30年。,（六）抗原性：有4種主要抗原成分1．莢膜多肽抗原：與毒力有關，是一種半抗原，此抗原的抗體無保護作用，但有特異性較強，可用該抗體進行莢膜腫脹試驗及熒光抗體法進行鑒定細菌。,（六）抗原性：有4種主要抗原成分2．菌體多糖抗原：當毒力無關，但性質(zhì)穩(wěn)定，耐高溫高壓，抗原性不被破壞?？捎脕碇苽涮烤覠岢恋矸磻每乖?，即A

18、scoli氏反應。此法特異性不高，與其它芽孢菌能發(fā)生交叉反應。3．保護性蛋白抗原（PA）：是毒素組成成分，具有免疫原性，能使機體產(chǎn)生抗體保護被感染。4.芽孢抗原,（七）毒素和毒力1．莢膜：抗吞噬和消除抗體作用，利于細菌擴散。2．炭疽毒素：包括水腫毒素和致死性毒素2種，由3個亞單位組成： 水腫因子（EF）（脂蛋白） 致死因子（LF）（蛋白質(zhì)） 保護性抗原（PA）（蛋白質(zhì)

19、）三者單獨均無毒性作用，只有PA-EF或PA-LF結合才有致病作用。作用機理：毒素作用于微血管內(nèi)皮C，使之通透性增強，損害腎臟，干擾糖代謝，引起彌散性血管內(nèi)凝血，導致動物死亡。,（八）微生物學診斷嚴禁剖檢，自耳根部采血，必要時切開肋間取脾臟，皮膚炭疽取滲出液。1．細菌學檢查①取材、涂片、染色、鏡檢：發(fā)現(xiàn)有莢膜的竹節(jié)狀大桿菌（初步診斷）。②分離培養(yǎng)：a. 普通平板。 b. 血平板。

20、 c. 選擇性培養(yǎng)基：如戊烷脒瓊脂、 溶菌酶－正鐵 血紅素瓊脂、Knisely培養(yǎng)基，37℃ 16－20h挑選可疑菌落與其它大桿菌作鑒別診斷。,③生化試驗④致病性試驗：被檢病料制成1∶5懸液，小白鼠0.1ml皮下注射，兔、豚鼠0.2-0.3ml，動物死于敗血癥，剖檢取臟器涂片鏡檢可見G+有莢膜大桿菌，確診。,2．血清學試驗：用已知抗體，檢測炭疽抗原。①Ascoli氏沉淀反應：1902年創(chuàng)立，用

21、加熱抽提炭疽桿菌多糖抗原與已知抗體進行沉淀反應，適用于各種病料、皮張、腐敗尸體。缺點是特異性不高，敏感性差。②間接血凝試驗：抗血清吸附于炭粉或乳膠上，進行玻片凝集試驗。③青霉素串珠試驗。④熒光抗體試驗。⑤瓊脂擴散試驗：檢查是否有PA產(chǎn)生。,（九）防治1．Ⅱ號炭疽芽胞苗：巴斯德將強毒株 42.5 ℃培養(yǎng)10-12天，使其喪失形成芽孢的能力，然后35℃ 培育4-7天，使其恢復形成芽孢的能力，用這種細菌制成疫苗叫Ⅱ號炭疽芽胞苗。

22、2．無毒炭疽芽孢苗：南非畜牧獸醫(yī)研究所選育的一株弱毒變種，失去形成莢膜能力，比Ⅱ號炭疽芽孢易余毒力強。此疫苗對山羊有強烈反應,可引起嚴重反應，甚至死亡。3．抗炭疽血清以下圖片為鼠疫相關,鼠疫的壞死及出血,二、蠟樣芽孢桿菌廣泛存在在于自然界，如土壤、水、空氣、飼料、食品，一定條件下，對人致?。阂鹑宋改c道感染（食物中毒）、眼球炎、新生兒上呼吸道感染和臍帶炎。自然情況下，引起牛的乳腺炎，驢的皮下水腫，犬，貓腹瀉。,蠟樣芽孢桿菌,

23、第二節(jié) 梭菌屬一、屬的特性 厭氧芽孢桿菌，芽孢呈卵圓形或圓形，直徑大于菌體，使菌體膨大呈梭形，故得名。大多數(shù)有鞭毛（魏氏梭菌除外），無莢膜（魏氏梭菌除外），G+。二、分類及所致疾病本屬有80個種，多為非致病菌，常見致病菌約為11種。,三、疾病類型及診斷原則疾病類型有5大類。1．氣腫疽與惡性水腫：急性敗血癥且有氣性水腫癥狀。 氣腫疽：氣腫疽梭菌引起，經(jīng)消化道感染。 惡性水腫：病原復雜，動物（腐敗梭菌）、人

24、 （A型產(chǎn)氣莢膜梭菌）。診斷原則：病原菌的檢查。,2．羊快疫、羊猝狙、腸毒血癥、黑疫、細菌性血紅素尿：均為毒血癥。 （1）羊猝狙：C型魏梭菌引起。（2）腸毒血癥：B型魏氏梭菌引起。 這兩個病，細菌不一定侵入體內(nèi)，而在腸道中產(chǎn)生毒素，故微生物診斷主要靠腸內(nèi)容毒素檢查（查毒素）,2．羊快疫、羊猝狙、腸毒血癥、黑疫、細菌性血紅素尿：均為毒血癥。 （3）羊快疫：腐敗梭菌經(jīng)消化道感染，進入血液造成敗血癥，主要檢查病原。（4）

25、黑疫：B型諾維氏梭菌（5）細菌性血紅素尿：溶血梭菌此二菌存在于肝臟，當肝受損時，乘機繁殖，產(chǎn)生毒素致病，主要查病原，次要查毒素。,3．羔羊痢疾，犢牛痢疾，人禽的壞死性腸炎由魏氏梭菌在腸道內(nèi)產(chǎn)生毒素所致，細菌不一定侵入體內(nèi)，主要查毒素。4．人畜的肉毒中毒、人魏氏梭菌食物中毒：均由病原菌在食物或飼料中生長繁殖，產(chǎn)生毒素被食入而中毒。肉毒癥：主要檢查肉毒毒素，其次細菌學檢查。魏氏梭菌食物中毒：可疑食物分離細菌，并測定其

26、 毒素產(chǎn)生能力。5．破傷風：破傷風梭菌經(jīng)傷口感染，產(chǎn)生破傷風毒素引起，癥狀極為特征“木馬狀”，不需微生物診斷。,四、梭菌屬分離鑒定應注意事項1．專性厭氧，必須采用厭氧培養(yǎng)物。焦性沒食子酸法、共棲法，肝塊肉湯、鐵釘牛乳。2．培養(yǎng)基必須是新鮮配制，厭氧條件下保存。3．梭菌在培養(yǎng)基表面蔓延生長，不易得到單個菌落，為了得到單個菌落，可將瓊脂量加到4~6%（一般2%），或劃線接種后在表面再加注一層瓊脂培養(yǎng)基，以限制

27、其蔓延生長。,四、梭菌屬分離鑒定應注意事項4．污染嚴重時，80℃ 20min殺死雜菌，25℃下培養(yǎng)。5．腐敗梭菌，魏氏梭菌容易在死后侵入動物體，而諾維梭菌、溶血梭菌存在正常動物體內(nèi)，故從動物體分離出這些梭菌，并不能肯定它們就是病原，應進行毒力測定。,五、產(chǎn)氣莢膜梭菌舊名：魏氏梭菌，自然界分布廣，可見于污水，土壤，飼料，食物及人畜腸道中，一定條件下，引起多種嚴重疾病。（一）形態(tài)染色特征 G+粗大正直桿菌，單在或成雙排列，無鞭毛

28、，一般條件下培養(yǎng)芽孢很少產(chǎn)生，有莢膜。,產(chǎn)氣莢膜梭菌（二）培養(yǎng)特性厭氧要求不高，普通培養(yǎng)基上易生長。1．葡萄糖血平板：圓形，光滑，隆起，淡灰白色中等大小菌落，有的可形成圓盤形邊緣呈鋸齒狀，表面有輻射狀條紋的“勛章”樣大菌落，產(chǎn)生“雙重溶血環(huán)”內(nèi)環(huán)β溶血，外環(huán)為α溶血。2．肝塊肉湯：5-6h，均勻渾濁，產(chǎn)生大量氣體。,（三）生化特性1．牛乳暴烈發(fā)酵：魏氏梭菌接種牛乳培養(yǎng)基8-10h后，發(fā)酵牛乳中的乳糖使牛乳酸凝，同時產(chǎn)生大量氣體

29、使凝塊變多孔的海綿狀，嚴重時，被沖成數(shù)段，甚至噴出管外。2．明膠液化，糖發(fā)酵⊕ H2S+ 吲哚－ HNO3－,（四）型別及病原性據(jù)毒素將該菌分為5個型：A，B，C，D，EA型產(chǎn)氣莢膜梭菌：引起人畜氣性壞疽，食物中毒，牛、羔羊、仔豬、兔、腸毒血癥。B～：羔羊痢疾，其它動物腸毒血癥。C～：綿羊猝狙，還有腸毒血癥及壞死性腸炎。D～：羔羊，綿羊，牛腸毒血癥。E～：犢牛，羔羊腸毒血癥，但很少發(fā)生,（五）微生物學診斷細

30、菌學診斷意義不大，因為魏氏梭菌是人畜腸道中常見菌，或者死后被侵入，從病料中檢出該菌并不能說明它就是病原。必須進行腸內(nèi)容物毒素檢查。1．方法：回腸內(nèi)容物→加適量滅菌生理鹽水作1-3倍稀釋→離心取上清，濾過除菌→濾液靜脈注射家兔（1-3ml），小鼠（0.1-0.3ml）→數(shù)分鐘至10小時內(nèi)死亡，證明有毒素存在。2．為了進一步證明是否為魏氏梭菌毒素及毒素型，必須進行毒素中和試驗。方法：上述濾液3份。,I+C型魏氏梭菌抗毒素血清

31、 Ⅱ+D型魏氏梭菌抗毒素血清 37℃作用40min→靜脈注射小鼠或兔子 Ⅲ+生理鹽水觀察12h, 記錄結果如下：D型抗毒素血清可保護 C型抗毒素血清也可保護————A型毒素 C型抗毒素血清不能保護————D型毒素D型抗毒素血清不保護 C型抗毒素血清可保護—

32、———B型或C型毒素 C型也不保護————可能是E型或不是魏氏梭菌毒 素，再用E型血清試驗確定,,E型能保護——E型毒素。 E型不能保護——不是魏氏梭菌毒素。 不能區(qū)分B型或C型毒

33、素時，濾液中加入0.25~0.5%胰酶，37℃作用30-60min，離心沉淀取上清再與C型抗血清進行中和保護試驗。C型抗毒素血清不能保護————B型毒素C型抗毒素血清能保護————C型毒素（原因B型毒素中的ε毒素尚為不顯毒性的原生毒素時，可被C型血清中和； ε原生毒素被細菌產(chǎn)生的蛋白酶激活，顯示出毒力，C型血清就不能中和它了）。 （六）免疫防治羊快疫，羊猝狙，腸毒血癥，三聯(lián)苗防治,,六、肉毒梭菌一種腐生性細菌，分部廣泛，

34、不能在活的機體內(nèi)生長繁殖。在一定條件下，生長繁殖產(chǎn)生肉毒毒素，人畜食入毒素污染的食物飼料引起中毒。肉毒毒素是迄今已知化學毒素及細菌毒素中毒性最強的一種，比KCN強10000倍，1g殺死20億只老鼠， 100萬個人。七、氣腫疽梭菌又名費氏梭菌，俗稱黑腿病桿菌，引起氣腫疽。主要發(fā)生于牛，癥狀主要是肌肉豐滿部位發(fā)生氣性水腫，受害肌肉呈暗紅色，故又稱為黑腿病。八、腐敗梭菌引起人和動物的惡性水腫，還引起羊快疫。,九、諾維梭菌按照其毒素

35、差異，可分4個菌型：A型：引起人和動物惡性水腫，又稱水腫梭菌，公羊因斗毆引起頭部感染而發(fā)生“大頭病”。B型：引起綿羊的黑疫，患病動物皮下靜脈顯著充血，使皮膚呈暗黑色外觀。C型：引起水牛骨髓炎，表現(xiàn)為骨髓的漸進性壞死與化膿 （僅發(fā)病于印尼）。D型：引起牛的細菌性血紅尿，（我國尚無報道）。,十、破傷風梭菌引起人畜的破傷風，以骨骼肌發(fā)生強直性痙攣的癥狀為特征。必須有傷口才感染。,破傷風梭菌，革蘭染色 破傷風梭菌是