蘇云金芽胞桿菌gerE基因功能的研究.pdf

1、蘇云金芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis,簡(jiǎn)稱Bt)因其有殺蟲效果好、對(duì)人類無害等優(yōu)勢(shì),成為了目前世界上田間應(yīng)用最為廣泛的生物殺蟲劑。它的顯著特點(diǎn)是在形成芽胞的同時(shí),能夠生成由cry或cyt基因編碼的殺蟲晶體蛋白(Insecticidal crystal proteins,簡(jiǎn)稱ICPs)。目前芽胞桿菌芽胞期的基因表達(dá)調(diào)控以枯草芽胞桿菌為模式研究得較為深入,而Bt芽胞早期cry基因調(diào)控的研究較多,芽胞晚期對(duì)cry基因的

2、表達(dá)調(diào)控研究很少。
　　 芽胞桿菌在芽胞期的母細(xì)胞中存在四個(gè)級(jí)聯(lián)調(diào)控的轉(zhuǎn)錄因子σE、SpoIIID、σK、GerE;它們是芽胞期母細(xì)胞內(nèi)重要的時(shí)序調(diào)控因子,調(diào)節(jié)母細(xì)胞中大量基因的轉(zhuǎn)錄。其中σE、σK作為sigma因子負(fù)責(zé)識(shí)別特異性的啟動(dòng)子序列,而SpoIIID、GerE是小分子量的特異性結(jié)合蛋白,對(duì)σE或σK因子控制轉(zhuǎn)錄的相關(guān)基因起調(diào)控的作用。目前,Bt中GerE如何對(duì)cry基因的表達(dá)調(diào)控作用還不清楚。
　　 本論文利用

3、基因重組技術(shù)敲除了蘇云金芽胞桿菌HD-73菌株中的gerE基因,構(gòu)建了gerE基因缺失突變菌株HD(ΔgetE),利用高拷貝載體pHT315攜帶gerE基因及其啟動(dòng)子序列在HD(ΔgerE)中表達(dá),得到gerE基因的過量表達(dá)菌株HD(ΔgerE::getE)。首先,我們明確了gerE基因是芽胞晚期表達(dá)的基因并且在芽胞期的后期一直處于高水平的表達(dá)。通過觀察,在表型上,gerE基因的缺失延遲了芽胞的裂解時(shí)間,使得活芽胞的數(shù)量降低,影響了芽胞