蛋白質沉淀反應實驗

1、蛋白質的沉淀反應蛋白質的沉淀反應一、目的和要求一、目的和要求1、加深對蛋白質膠體溶液穩(wěn)定因素的認識、加深對蛋白質膠體溶液穩(wěn)定因素的認識2、掌握幾種沉淀蛋白質的方法、掌握幾種沉淀蛋白質的方法3、了解蛋白質變性與沉淀的關系、了解蛋白質變性與沉淀的關系二、沉淀反應二、沉淀反應（一）原理（一）原理在水溶液中，蛋白質分子的表面上由于有水化層和同性電荷的作用，所以成為在水溶液中，蛋白質分子的表面上由于有水化層和同性電荷的作用，所以成為穩(wěn)定的膠體顆粒

2、。但這種穩(wěn)定的狀態(tài)是有條件的。在某些理化因素的作用下，蛋白穩(wěn)定的膠體顆粒。但這種穩(wěn)定的狀態(tài)是有條件的。在某些理化因素的作用下，蛋白質分子表面帶電性質發(fā)生變化、脫水甚至變性，則會以固態(tài)形式從溶液中析出，這質分子表面帶電性質發(fā)生變化、脫水甚至變性，則會以固態(tài)形式從溶液中析出，這個過程就稱為蛋白質的沉淀反應。蛋白質的沉淀反應可分為以下兩種類型：個過程就稱為蛋白質的沉淀反應。蛋白質的沉淀反應可分為以下兩種類型：1、可逆沉淀反應、可逆沉淀反應沉淀

3、反應發(fā)生后，蛋白質分子內部結構并沒有發(fā)生大的或者顯著變化。在沉淀沉淀反應發(fā)生后，蛋白質分子內部結構并沒有發(fā)生大的或者顯著變化。在沉淀因素去除后，又可恢復其親水性，這種沉淀反應就是可逆沉淀反應，也叫做不變性因素去除后，又可恢復其親水性，這種沉淀反應就是可逆沉淀反應，也叫做不變性沉淀反應。屬于這類沉淀反應的有鹽析作用、等電點沉淀以及在低溫下短時間的有沉淀反應。屬于這類沉淀反應的有鹽析作用、等電點沉淀以及在低溫下短時間的有機溶劑沉淀法等。機溶

4、劑沉淀法等。2、不可逆沉淀反應、不可逆沉淀反應蛋白質在沉淀的同時，其空間結構發(fā)生大的改變，許多副鍵發(fā)生斷裂，即使除蛋白質在沉淀的同時，其空間結構發(fā)生大的改變，許多副鍵發(fā)生斷裂，即使除去沉淀因素，蛋白質也不會恢復其親水性，并喪失生物活性，這種沉淀反應就是不去沉淀因素，蛋白質也不會恢復其親水性，并喪失生物活性，這種沉淀反應就是不可逆沉淀反應。重金屬鹽、生物堿試劑、強酸、強堿、加熱、強烈震蕩、有機溶劑可逆沉淀反應。重金屬鹽、生物堿試劑、強酸、

5、強堿、加熱、強烈震蕩、有機溶劑等都能使蛋白質發(fā)生不可逆沉淀反應。等都能使蛋白質發(fā)生不可逆沉淀反應。（二）鹽析（二）鹽析1、材料與試劑、材料與試劑（1）10%的卵清蛋白溶液（要求新鮮配制）的卵清蛋白溶液（要求新鮮配制）、濃蛋白溶液（、濃蛋白溶液（2）飽和硫酸銨溶液）飽和硫酸銨溶液（3）固體硫酸銨）固體硫酸銨（4）濾紙、玻棒）濾紙、玻棒2、操作方法、操作方法（1）取試管一支，加入濃蛋白溶液）取試管一支，加入濃蛋白溶液2ml，再加等量的飽和硫

6、酸銨溶液，混勻后，再加等量的飽和硫酸銨溶液，混勻后靜置靜置10分鐘將出現(xiàn)沉淀。此沉淀物為球蛋白。分鐘將出現(xiàn)沉淀。此沉淀物為球蛋白。（2）取上清液于另一支試管。）取上清液于另一支試管。（五）有機溶劑沉淀反應（五）有機溶劑沉淀反應1、材料與試劑、材料與試劑（1）10%的卵清蛋白溶液的卵清蛋白溶液（2）95%乙醇溶液乙醇溶液2、操作方法、操作方法取試管取試管1支，加支，加10%的卵清蛋白溶液的卵清蛋白溶液10滴后，再加入滴后，再加入95%乙醇