豬細(xì)小病毒cpv酶聯(lián)免疫分析

1、豬細(xì)小病毒（豬細(xì)小病毒（CPV）酶聯(lián)免疫分析）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。48T使用目的：使用目的：本試劑盒定性測定豬血液、或其它相關(guān)組織中細(xì)小病毒（CPV）。實(shí)驗(yàn)原理：實(shí)驗(yàn)原理：本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）測定標(biāo)本中豬細(xì)小病毒（CPV）。用純化的豬細(xì)小病毒（CPV）抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中細(xì)小病毒（CPV）抗原相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP標(biāo)

2、記的細(xì)小病毒（CPV）抗體結(jié)合，形成抗體抗原酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中豬細(xì)小病毒（CPV）的存在與否。試劑盒組成：試劑盒組成：120倍濃縮洗滌液20ml1瓶7終止液3ml1瓶2酶標(biāo)試劑3ml1瓶8陽性對照0.5ml1瓶3酶標(biāo)包被板12孔4條9陰性對照0.5ml1瓶

3、4樣品稀釋液3ml1瓶10說明書1份5顯色劑A液3ml1瓶11封板膜2張6顯色劑B液3ml1瓶12密封袋1個標(biāo)本要求：標(biāo)本要求：1標(biāo)本處理：血清、血漿標(biāo)本可直接檢測2標(biāo)本按要求制備后盡早進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。如不能及時(shí)檢測，可將標(biāo)本在20℃保存一個月，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。3不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟：操作步驟：1.編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白

4、對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）2.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照（標(biāo)準(zhǔn)品）50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6.

5、加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。7.溫育：操作同3。8.洗滌：操作同5。9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。結(jié)果判定：結(jié)果判定：試驗(yàn)有效性：陽性對照孔平均值≥1.00陰性對照平均值≤0.15臨界

6、值（CUTOFF）計(jì)算：臨界值=陰性對照孔平均值0.15陰性判定：樣品OD值臨界值（CUTOFF）者為細(xì)小病毒（CPV）陰性陽性判定：樣品OD值≥臨界值（CUTOFF）者為細(xì)小病毒（CPV）陽性注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)1操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，本試劑不同批號組分不得混用。2試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡1530分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。3濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響