Dasatinib誘導人急性髓性白血病細胞分化的藥效及其機制研究.pdf

1、浙江大學碩士學位論文Dasatinib誘導人急性髓性白血病細胞分化的藥效及其機制研究姓名：鐘里科申請學位級別：碩士專業(yè)：藥學指導教師：何俏軍楊波20130302系卻未見報道。因此，本課題擬通過實驗方法研究Dasatinib誘導AML細胞的分化作用，并且進一步探索可能存在的分子機制。研究方法：選用人白血病細胞株HL60和NB4為研究對象，考察Dasatinib對AML細胞的增殖和周期分布的影響，并檢測Dasatinib誘導AML細胞分化的

2、能力。采用臺盼蘭拒染法結(jié)合血細胞計數(shù)板計數(shù)來觀察細胞增殖情況，描繪細胞生長曲線；細胞經(jīng)AnllexinVPI雙染后采用流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡情況；細胞經(jīng)PI染色后采用流式細胞術(shù)分析細胞周期的變化情況；細胞經(jīng)cDllbPE抗體結(jié)合后采用流式細胞術(shù)檢測細胞表面分化抗原cDllb表達；應用westemblot檢測細胞凋亡、周期和分化相關(guān)蛋白(PARP、caspase3、cIeaVed—caspase3、c—Myc、p21、p27、Pu1、C／

3、EBPB)的表達；應用硝基四氮唑藍(NBT)還原實驗檢測細胞分化能力；應用瑞氏一吉姆薩染色觀察細胞形態(tài)學改變；應用RealtimePcR檢測細胞內(nèi)分化相關(guān)因子(戶u7、C／船P僅、C／聊)的mI塒A表達水平；建立人白血病裸小鼠移植瘤模型評價Dasatinib的體內(nèi)藥效；選用人白血病細胞株HL60和NB4為研究對象，考察Dasatinib誘導AML細胞分化的分子機制。細胞經(jīng)cDllb—PE抗體結(jié)合后采用流式細胞術(shù)檢測細胞表面分化抗原cDl

4、lb表達；細胞經(jīng)PI染色后采用流式細胞術(shù)分析細胞周期的變化情況；應用NBT還原實驗檢測細胞分化能力；應用瑞氏吉姆薩染色觀察細胞形態(tài)學改變；應用westemblot檢測蛋白(Pu1、p—S衛(wèi)虹1(s727)、p38、p—p38、州K、p—JNK、RAR儀、p—STATl(Y701)、ST—汀l、MEK、p—MEK、ERK、p—ERK、AKT、p—AKT、LC3)的表達；應用Real—timePCR檢測細胞內(nèi)C撒咒一J『D、尉rG—G、衄F(xiàn)