肺炎鏈球菌研究現(xiàn)況及血清分型

1、肺炎鏈球菌研究現(xiàn)況及血清分型,邵祝軍2013-3-20,傳染病監(jiān)測：流行病學(xué)+實(shí)驗(yàn)室,2,,,環(huán)境,傳 播,監(jiān) 測,,,,,,人 群,,,,,健康人群,暴露未暴露,感染,,,,,,,未感染,病例,攜帶者,,呼吸道傳染病室,細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室工作內(nèi)容,病原學(xué)：采樣、運(yùn)輸、培養(yǎng)、分離、鑒定、分型、保存抗生素耐藥性檢測免疫學(xué)：血清學(xué)、免疫效果評價(jià)分子生物學(xué)測：PCR檢測、分型、聚類、遺傳變異、進(jìn)化分析,肺炎鏈球菌（ Stre

2、ptococcus pneumoniae),又名肺炎球菌(Pneumococcus)或肺炎雙球菌。多成雙或短鏈排列,革蘭染色陽性肺炎球菌主要抗原： ① 莢膜多糖：致病的主要基礎(chǔ)及血清分型依據(jù)，超 過90種血清型 ，僅少數(shù)血清型致病 ② 菌體抗原：C多糖，可與C反應(yīng)蛋白發(fā)生沉淀反應(yīng)。 M蛋白：型特異性蛋白α溶血（草綠溶血環(huán)）。Optochin敏感試驗(yàn)陽性。膽汁

3、溶解試驗(yàn)：自溶酶，膽汁或脫氧膽酸鹽可激活自溶酶，加速菌體自溶。膽汁溶解試驗(yàn)陽性。可與甲型溶血性鏈球菌區(qū)別。,肺炎球菌血清型,PCV7: 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F, 23FPHiD10: 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F, 23F, 1, 5, 7FPCV13:4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F, 23F, 1, 5, 7F, 3, 6A, 19A,91 different capsul

4、e types (serotypes).110F18B28A40211A18C28F41311B18F2941F411C19A3142511D19B32A436A11F19C32F446B12A19F33A456C12B2033B467A12F2133C47A7B1322A33D47F7C1422F33

5、F487F15A23A34815B23B35A9A15C23F35B9L15F24A35C9N16A24B35F9V16F24F3610A17A25A3710B17F25F3810C18A2739,,肺炎球菌的傳播,廣泛存在的并易于傳播5-72%的健康成人和27-58%的健康兒童的鼻咽部攜帶1單種血清型可在鼻咽部長期存在肺炎球菌可通過頻繁密

6、切的接觸在人與人之間傳播1. Pneumococcal Disease. CDC. Pink Book Chapters (12th edition,2011).,健康人群,暴露未暴露,感染,,,,,,,未感染,病例,攜帶者,,肺炎球菌的致病機(jī)理,細(xì)菌黏附和穿透粘膜,細(xì)菌血中生存,細(xì)菌穿過血腦屏障,Meningococcal Disease, Nancy E. Rosenstein,N Engl J Med, 2001,,,,,中

7、耳炎、鼻竇炎、支氣管炎,肺炎,菌血癥/敗血癥,腦膜炎,,,疾病嚴(yán)重程度,X 1000,X 100,X 10,,患病率,,侵襲性,非侵襲性,肺炎鏈球菌感染性疾病,Annual incidence of meningitis in <2-year-olds7-10/100,000 - United States,American Academy of Pediatrics. Pediatrics. 2000;106:367-376

8、& MMWR. 1997;46:1-24,預(yù)計(jì)年病例數(shù),WHO對全球尚未普種/或即將有疫苗可預(yù)防疾病的分類,WHO. Weekly Epidemiol Rec 2008;83:1–16,Lancet 2009; 374: 893–902WHO. Report of a meeting on priorities for pneumococcal and Haemophilus influenzae type b (Hib) v

9、accine development and introduction. Geneva, February 9–12, 1999. WHO/V&B/01.14. http://www.who.int/vaccines-documents/DoxGen/H4-Inno.htm (accessed July 30, 2009).WHO. Pneumococcal vaccines. Wkly Epidemiol Rec 2003;

10、78: 110–19.WHO. Pneumococcal conjugate vaccine for childhood immunization —WHO position paper. Wkly Epidemiol Rec 2007; 82: 93–104.,1450萬肺炎球菌感染病例 ，發(fā)病率為2331/10萬。 肺炎病例1380萬（95.6%），占到所有肺炎病例（16000萬）的8.6%。腦膜炎病例（10.3萬）0.7%，

11、發(fā)病率估計(jì)為17/10萬。NPNM病例（53.8萬） 3.7%82.6萬死亡，5歲以下兒童死亡病例的11% （不包括HIV陽性兒童)。,2000年，全球5歲以下兒童肺炎鏈球菌感染疾病負(fù)擔(dān)估計(jì),2000年，全球5歲以下肺炎球菌病發(fā)病病例數(shù),India: 27%China: 12%Nigeria: 5%Pakistan: 5%Bangladesh: 4%Indonesia: 3%Ethiopia: 3%Congo: 3%

12、Kenya: 2%Philippines: 2%,2000年全球5歲以下兒童肺炎球菌感染死亡病例數(shù),國家（死亡病例數(shù)）India (142 000) Nigeria(86 000) Ethiopia (57 000) Congo (51 000)Afghanistan (31 000) China (30 000)Pakistan (27 000) Bangladesh (21 000) Angola (20 00

13、0)Uganda (19 000),2008年全球5歲以下兒童死亡病因,2008年，全球小于5歲的兒童死亡879萬（不包括HIV感染），597萬死于傳染?。?8%）。 前5位的國家：印度、尼日利亞、剛果、巴基斯坦、中國。,Source: RE Black et al, Global, regional, and national causes of child mortality in 2008: a systematic anal

14、ysis, Lancet, 2010Margaret Kendrick Hostetter，NEJM,2012,WHO：2008年疫苗可預(yù)防疾病,肺炎球菌病: 476 000 Hib: 199 000 百日咳: 195 000 麻疹: 118 000 新生兒破傷風(fēng): 59 000 破傷風(fēng) (non-neonatal): 2 000 輪狀病毒：453 000,WHO估計(jì)，2008年全球5歲以下兒童150萬死于疫苗可預(yù)防疾病，

15、占5歲以下兒童死亡的17%,IPD病例的危害,75%的IPD病例和83%的肺炎球菌腦膜炎病例發(fā)生在2歲以下的兒童中，對于肺炎而言，8.7%~52.4%的病例發(fā)生在小于6個(gè)月的嬰幼兒。IPD 病例：病死率高，發(fā)展中國家，菌血癥20%，腦膜炎50%，嬰幼兒是高危人群，發(fā)達(dá)國家，菌血癥成人病死率15~20%，老年人中30%~40%。后遺癥中耳炎：公共衛(wèi)生問題肺炎球菌感染定義：血液或其他無菌部位標(biāo)本（CSF）分離到細(xì)菌，但是對于無菌

16、血癥的肺炎病例，判斷起來比較困難。,Russel F et al 2011，SAGE meeting, 8–10 November 2011,肺炎球菌病疾病負(fù)擔(dān),WHO估計(jì)，2008年全球5歲以下兒童死亡880萬，其中，5.4%（47.6萬）死于肺炎球菌感染，多數(shù)在發(fā)展中國家，非洲和亞洲。HIV感染加重疾病負(fù)擔(dān)。肺炎球菌是兒童重癥肺炎的主要致病菌，約50%的重癥肺炎的病原菌是肺炎鏈球菌，在致死病例中可能超過50% 。疾病負(fù)擔(dān)估算的

17、影響因素： 病例的定義、實(shí)驗(yàn)室檢測能力、監(jiān)測系統(tǒng)的敏感性等。,1.WHO. Weekly Epidemiol April 2012, 87:129-144 2.WHO. Weekly Epidemiol Rec 2007; 82: 93-1043. UNICEF/WHO. Pneumonia: The forgotten killer of children, 2006 Sep,衛(wèi)生部2011年《中國婦幼衛(wèi)生事業(yè)發(fā)展報(bào)告》導(dǎo)致5歲

18、以下兒童死亡的前5位死因順位是：①早產(chǎn)或低出生體重， ②肺炎， ③出生窒息， ④先天性心臟病，⑤意外窒息，占全部死亡原因的60.7%,預(yù)防策略,接種肺炎球菌疫苗是優(yōu)選的預(yù)防方式降低 肺炎球菌感染的嚴(yán)重危害… 抗生素的耐藥性…,WHO對多價(jià)肺炎球菌多糖疫苗推薦人群為2歲以上的肺炎球菌性疾病高危人群，包括：65歲以上健康老年人，尤其是在公共機(jī)構(gòu)中生活的老年人慢性呼吸系統(tǒng)疾病、糖尿病、腎病綜合征和某種免疫功能缺陷的患者，尤其是功能性

19、或解剖學(xué)上無脾者,“由于肺炎球菌疾病在兒童和成人中的高負(fù)擔(dān)，WHO優(yōu)先考慮在發(fā)達(dá)和發(fā)展中國家進(jìn)行肺炎球菌疾病的預(yù)防”,* WHO Position Paper on 23-valent pneumococcal polysaccharide vaccine. Wkly Epidemiol Rec 2008;83(Oct 7):373-84. www.who.int/wer/2008/wer8342.pdf,,,肺炎球菌疫苗發(fā)展史,,

20、1911,1945,1976,1983,2000,2009,2010,Whole cell vaccine,4-valent PPV,6-,12-,14-Valent PPV,Merck: 23-valent PPV,PPV,PCV,Wyeth: PCV7,GSK: PCV10,Pfizer: PCV13,Wright AE, et al. Lancet. 1914; 1:1-10, 87-95. MacLeod CM, et al

21、. J Exp Med. 1945; 82:445-465.CDC.MMWR. 1981; 30: 410-412, 417-419. Austrian R, et al. Trans Assoc Am Physicians. 1976; 89: 184-194.Hilleman et al. BullWHO. 1978http://www.merckvaccines.com/Products/pneumovax23/Pages/

22、home.aspx; http://www.ema.europa.eu http: fda.gov.,目前市場上的肺炎球菌疫苗,肺炎球菌多糖疫苗：用于>2歲Pneumovax 23: 默克/默沙東Pneumo 23： 賽諾菲-巴斯德惠益康(23價(jià))： 成都生物研究所肺炎球菌結(jié)合疫苗：用于≤5歲Prevenar： 輝瑞-惠氏Prevenar 13： 輝瑞-惠氏Syn

23、florix ： 葛蘭素史克,全球5歲以下兒童IPD病例肺炎球菌主要血清型分布,6~11個(gè)血清型引起70%的IPD病例。,,1, 5, 6A, 6B, 14, 19F, 23F,Hope L. Johnson，Plos Medicine，2010,~2歲兒童肺炎球菌病主要血清型分布,2歲~5歲兒童肺炎球菌病主要血清型分布,14,6B,19F,23F,6A,5,18C,19A,1,9V,14,1,6B,18C,23F,19

24、F,6A,5,4,9V,,IPD病例肺炎球菌血清型構(gòu)成具有地域性差異,Hausdorff WP et al. CID, 2000,亞洲兒童IPD病例,歐洲兒童和成人IPD病例,,,中國肺炎球菌病疾病現(xiàn)況,疾病負(fù)擔(dān)數(shù)據(jù)有限或不系統(tǒng)發(fā)病數(shù)及發(fā)病率病例的地域、年齡分布特征血清型分布和構(gòu)成 菌株耐藥情況 目前使用疫苗的血清型別覆蓋率 疫苗研發(fā) 模仿 跟風(fēng) 抗生素耐藥血清型變遷 6A 6B, 19F

25、 19A,細(xì)菌性呼吸道傳染病實(shí)驗(yàn)室常用技術(shù),培養(yǎng)基、細(xì)菌的接種、分離培養(yǎng)細(xì)菌鑒定、血清分型耐藥性檢測PCR及Real time PCR 技術(shù)用于標(biāo)本的病原學(xué)檢測和血清分型細(xì)菌的分子分型,26,疾病癥候群監(jiān)測,27,未知病原,醫(yī)院,病例調(diào)查實(shí)驗(yàn)室檢查,,,,,√,不同“癥候群疾病 ”病原體相互交錯(cuò),28,“發(fā)熱呼吸道”癥候群“發(fā)熱伴出疹”癥候群“發(fā)熱伴出血”癥候群“腹瀉”癥候群“腦炎腦膜炎”癥候群,流感麻疹流

26、腦肺炎鏈球菌流感嗜血桿菌肺結(jié)核……,種瓜得瓜，種豆得豆，種瓜亦可以得豆,？,,醫(yī)院是傳染病監(jiān)測的關(guān)鍵環(huán)節(jié),病例診斷標(biāo)本采集是核心（無菌操作，標(biāo)本足量，應(yīng)充分考慮到臨床常規(guī)檢測的標(biāo)本量的需求）標(biāo)本床前接種培養(yǎng)（培養(yǎng)皿或血培養(yǎng)瓶），應(yīng)注意避免污染和干擾細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本登記、分裝、保存分離菌株鑒定和結(jié)果判斷（侵襲性和非侵襲性病例）結(jié)果反饋,29,細(xì)菌性呼吸道傳染病標(biāo)本采集,1、急性上呼吸道感染: 鼻/咽拭子2、肺炎1

27、）鼻咽拭子/鼻咽抽吸物：2）尿液：3）痰液：4）血液：5）胸腔穿刺液：6）支氣管肺泡灌洗液。3、腦膜炎 1）腦脊液 2）血液,30,肺 炎癥狀、體征 影像學(xué)診斷，應(yīng)考慮疾病的進(jìn)行性改變。病原微生物學(xué)診斷：呼吸道分泌物分離培養(yǎng)，受正常菌群影響侵襲性的采樣，操作風(fēng)險(xiǎn)、接受程度影響。,鼻/咽拭子,31,血標(biāo)本,足量血標(biāo)本，床前接種血培養(yǎng)瓶 。成人：每次采樣抽血10mL，5mL注入準(zhǔn)備好的血培養(yǎng)瓶

28、。 兒童：每次采血5mL，3mL注入準(zhǔn)備好的血培養(yǎng)瓶 血培養(yǎng)瓶有細(xì)菌生長，轉(zhuǎn)種培養(yǎng)皿。血清可進(jìn)行PCR或Real time PCR檢測或抗體檢測。 建議：不建議用碘伏消毒瓶塞，如用碘伏消毒，應(yīng)用酒精脫碘。用70%酒精消毒血培養(yǎng)瓶橡皮塞子，酒精作用1分鐘；在血液注入血培養(yǎng)瓶之前，用無菌紗布或棉簽清除橡皮塞子表面剩余的酒精，然后注入血液。防止皮膚寄生菌或環(huán)境微生物引起的污染。芽孢桿菌屬、棒狀桿菌屬、痤瘡丙酸桿菌或凝固酶陰性的葡

29、萄球菌、不動桿菌等的標(biāo)本一般視為污染。,32,腦脊液標(biāo)本,不增菌，直接接種培養(yǎng)皿可做快速檢測（涂片染色、乳膠凝集檢測）PCR及Real time PCR 檢測,33,抗生素的使用與細(xì)菌培養(yǎng)（舉例）,病例1，孫xx：2007年1月8日出生， 2007年10月31日發(fā)病，河北邢臺寧晉縣醫(yī)院就診，11月1日，轉(zhuǎn)河北省兒童醫(yī)院住院，診斷為細(xì)菌性腦膜炎。11月1日，采集血標(biāo)本和腦脊液，采樣前使用抗生素治療。腦脊液乳膠凝集試驗(yàn)，腦脊液Real

30、time PCR陽性，血液和腦脊液標(biāo)本檢出Hib。病例2，張xx：2007年4月11日出生，2007-12-23發(fā)病，河北石家莊贊皇縣人民醫(yī)院治療，后轉(zhuǎn)省兒童醫(yī)院，診斷為細(xì)菌性腦膜炎。2007-12-25，采集血標(biāo)本和腦脊液，采樣前使用抗生素治療。腦脊液乳膠凝集試驗(yàn)、腦脊液Real time PCR陽性，血液和腦脊液標(biāo)本檢出Hib。,34,培養(yǎng)基及接種培養(yǎng),普通培養(yǎng)基（血平板、巧克力平板）選擇性培養(yǎng)基,35,培養(yǎng)基質(zhì)量控制,標(biāo)本接

31、種 菌落取菌環(huán)劃線接種培養(yǎng)鼻咽拭子涂布培養(yǎng)基后，應(yīng)取菌環(huán)劃線接種,細(xì)菌鑒定,Gram染色,36,奧普托欣敏感性抑菌環(huán)≥14mm,膽汁溶解試驗(yàn),觸酶試驗(yàn),生化鑒定,肺炎球菌,流感嗜血桿菌,血清分型（群）- 玻片凝集結(jié)果及判讀,細(xì)菌與一種抗血清凝集，和生理鹽水不凝集時(shí)，才能鑒定為該種血清型。 如果不能確定血清群，菌株為不可分群菌株（NG）或不可分型菌株（NT）。關(guān)于NG/NT菌株在生理鹽水中凝集，無論與任何抗血清發(fā)生強(qiáng)反應(yīng)，都

32、應(yīng)標(biāo)記為自凝菌。在生理鹽水中不自凝，和多種血清出現(xiàn)凝集，記為NG。在生理鹽水中不自凝，不和任何一個(gè)血清凝集，記作NG。,分型血清質(zhì)量控制,37,乳膠試劑盒,在待檢標(biāo)本上滴加乳膠懸液,混勻,輕搖反應(yīng),觀察結(jié)果,滴加待檢標(biāo)本,乳膠凝集快速檢測,細(xì)菌耐藥性檢測（1）,K-B紙片擴(kuò)散法：花費(fèi)最少，但是結(jié)果存在一定的不確定性，該方法可將檢測的分離株分為敏感、中介、耐藥或?qū)δ撤N抗生素的不敏感。然而，不能提供MIC值，及反映該菌株對抗生素的敏感

33、性減弱趨勢。,39,,16mm,6mm,CLSI或CA-SFM標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比對（核對質(zhì)控菌株的各項(xiàng)結(jié)果是否在質(zhì)控范圍內(nèi)）,影響因素：MIC、接種菌量、細(xì)菌生長率、抗生素含量擴(kuò)散性、平皿厚度、溫度孵育時(shí)間,細(xì)菌耐藥性檢測（2）,梯度試紙條法：操作簡單方便，連續(xù)梯度濃度，穩(wěn)定性好，檢測結(jié)果可表示為μg/ml，是一種半定量的檢測方法。價(jià)格較高，結(jié)果需要仔細(xì)判讀,40,細(xì)菌耐藥性檢測（3）,41,MIC肉湯稀釋法,MIC瓊脂稀釋法,可同時(shí)檢測多

34、株細(xì)菌，觀察細(xì)菌生長狀況制備平皿工作量大，抗生素要求精度高,Micrococcus letus ATCC 9341Penicillin G,7 – 0.25U – 43mm8 – 0.13U – 38mm9 – 0.06U – 35mm10 – 0.03U – 32mm11 – 0.015U – 24mm12 – 0.0075U – 16mm13

35、– 0.0038U – 8mm – Blank – 0mm,7,11,10,9,8,12,13,Branco,Discs of 6 mm,CSF標(biāo)本中抗生素濃度檢測,Micrococcus letus ATCC 9341,1,4,3,2,Blank,5,6,CSF samples,15 uL/disc,CSF標(biāo)本中抗生素濃度檢測,病例定義永遠(yuǎn)不可能完美,44,高度敏感的病例定義包括很多其它疾病病例特

36、異性降低更多的病例，工作量增大,高度特異的病例定義排除很多真實(shí)病例敏感性降低失去部分病例，工作量降低,敏感度 = 90/100 = 0.90 = 90%,假陰性率= 10/100 = 0.10 = 10%,特異度 = 80/100 = 0.80 = 80%,假陽性率 = 20/100 = 0.20 = 20%,病例定義——傳染病監(jiān)測的基石,侵襲性肺炎球菌病例Invasive Pneumococcal Diseases, I

37、PD,45,菌血癥腦膜炎肺炎非侵襲性感染,肺炎鏈球菌鑒別流程圖,46,,肺炎鏈球菌鑒定試驗(yàn),47,溶血,奧普托欣試驗(yàn),莢膜腫脹,膽汁溶解,傳統(tǒng)的基于莢膜的肺炎球菌血清分型（群）：多克隆/單克隆抗體,48,莢膜腫脹(金標(biāo)準(zhǔn)）,肺炎鏈球菌丹麥血清棋盤分型法,1. 菌株依賴性2. 成本高3. 技術(shù)操作要求較高4. 不同血清之間交叉反應(yīng)5. 結(jié)果解釋主觀性,49,較高的敏感性、特異性，克服交叉反應(yīng)。經(jīng)濟(jì)實(shí)用性：減少對

38、傳統(tǒng)血清分型的依賴高通量、方案可調(diào)整：一次實(shí)驗(yàn)可同時(shí)完成多個(gè)反應(yīng)，高通量檢測血清型，根據(jù)當(dāng)?shù)亓餍醒逍瓦M(jìn)行組合非培養(yǎng)依賴性：直接從標(biāo)本中檢測肺鏈及血清型操作簡單，結(jié)果判斷科學(xué)客觀新的特異的分型引物公布,type specific,Spn + control,,19F 3 15B 18 10A 7F,,,Control for multiplexassay reaction 2,Sequential multip

39、lex PCR deduction of pneumococcal serotypes. Pai et al 2006. JCM,PCR用于肺炎球菌分型,肺炎球菌PCR與Real time PCR 檢測,目標(biāo)基因包括：lytA基因（自溶素）ply基因（肺炎球菌溶血素）：檢測上呼吸道標(biāo)本時(shí)，易產(chǎn)生假陽性結(jié)果，一些非肺炎鏈球菌的α-溶血鏈球菌，這些細(xì)菌通常為呼吸道的正常菌群，如Streptococcus mitis和Streptococ

40、cus oralis，這些細(xì)菌又是也含有ply基因。psaA基因 （肺炎球菌表面黏附素）。,50,肺炎鏈球菌是革蘭氏陽性菌，使用溶菌酶和變?nèi)芫剡M(jìn)行消化，有利于去除細(xì)胞壁中的含量較高的肽聚糖，之后進(jìn)行消化裂解有助于提高DNA的含量。,基于非洲目前主要流行血清型的肺炎鏈球菌PCR血清分型方案*如果反應(yīng)2中6A/6B/6C/6D PCR陽性，則開展第9項(xiàng)檢測,基于美國目前主要流行血清型的肺炎鏈球菌PCR血清分型方案* 如果反應(yīng)1中

41、6A/6B/6C/6D PCR陽性，則開展第8項(xiàng)檢測,肺炎鏈球菌血清型分型引物 (http://www.cdc.gov/ncidod/biotech/strep/pcr.htm).,,,Capsule: diverse polysaccharides 6A ?2)-α-D-Gal-(1?3)-α-D-Glc-(1?3)-α-L-Rham-(1?3)-D-ribitol-(5-PO4- 6B ?2)-α

42、-D-Gal-(1?3)-α-D-Glc-(1?3)-α-L-Rham-(1?4)-D-ribitol-(5-PO4- 19A?4)-β-D-NAcMannose-(1?4)-α-D-Glc-(1?3)-α-L-Rham-(1-PO4- 19F?4)-β-D-NAcMannose-(1?4)-α-D-Glc-(1?2)-α-L-Rham-(1-PO4-Capsule Gene locusDiversi

43、ty of Capsule90 capsule types by Quellung reaction (1995)Common types (6A, 6B, 14, 19A, 19F…), uncommon types (16A, 36…),肺炎球菌莢膜,,,53,54,肺炎球菌6C 血清型,6A ?2) galactose (1?3) glucose (1?3) rhamnose (1?3) ribitol (5?phospha

44、te 6B ?2) galactose (1?3) glucose (1?3) rhamnose (1?4) ribitol (5?phosphate6C ?2) glucose (1?3) glucose (1?3) rhamnose (1?3) ribitol (5?phosphate,584,A,584,G,,,,,,,,,血清群6肺炎鏈球菌-6A/B/C/D,PCR檢測細(xì)菌性腦膜炎病原體流程,56,,肺炎球菌病監(jiān)測P

45、CR檢測注意事項(xiàng),57,病例定義 Real time PCR 靈敏性高，一般用于珍貴標(biāo)本中細(xì)菌的檢測和分型,不推薦常規(guī)用于細(xì)菌分離培養(yǎng)物的分型。PCR分型一般不用檢測所有的血清群，應(yīng)該根據(jù)流行的血清群或罕見的血清群的地理分布特征選擇常見的血清群檢測，一般應(yīng)重點(diǎn)檢測當(dāng)?shù)亓餍械难迦海ㄐ停?。肺炎鏈球菌，Ct ≤30，可用傳統(tǒng)PCR方法，如果Ct值>30，real time PCR方法用于血清分型可提高敏感性。,,《腦膜炎奈瑟菌、