梅毒的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)與技術(shù)規(guī)范

1、梅毒的實(shí)驗(yàn)室檢查與技術(shù)規(guī)范,朱穗蘭2013年3月2日,主要內(nèi)容,梅毒概述梅毒血清學(xué)檢測(cè)方法梅毒檢測(cè)技術(shù)規(guī)范,梅毒概述（一）,性接觸是主要的傳染途徑 未經(jīng)治療的患者在感染后的1年內(nèi)最具有傳染性 隨著病期的延長，傳染性越來越小 到感染后2年，通過性接觸一般無傳染性母 嬰 傳 播 在妊娠7周時(shí)，梅毒螺旋體即可通過胎盤傳染未經(jīng)治療者，雖已無性傳播（病期>2年），但妊娠時(shí)仍可傳染給胎兒,病期越長，傳染性越小;,

2、梅毒概述（二）,一期梅毒硬下疳和(或)腹股溝淋巴結(jié)腫大二期梅毒 可有一期梅毒史，病期在2年以內(nèi)有多形性皮疹、扁平濕疣等三期（晚期）梅毒可有一期或二期梅毒史，病期在2年以上皮膚黏膜損害等，包括神經(jīng)梅毒、心血管梅毒隱性（潛伏）梅毒 早期：病期在2年以內(nèi)；晚期：病期在2年以上。無任何梅毒性的癥狀和體征胎傳（先天）梅毒早期：在2歲前發(fā)生；晚期：在2歲以后發(fā)病。胎傳隱性梅毒：無臨床表現(xiàn),梅毒概述（三）,疑似病例、

3、確證病例診斷依據(jù)：病史癥狀實(shí)驗(yàn)室檢查梅毒的實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果對(duì)診斷有決定性意義,梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù),病原學(xué)檢測(cè)血清學(xué)檢測(cè),梅毒血清學(xué)檢測(cè)方法,,梅毒血清學(xué)檢測(cè)分類,(1) 非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn) （非特異性梅毒抗體）(2) 梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn) （特異性梅毒抗體）兩類方法。為什么梅毒實(shí)驗(yàn)室診斷需要兩類血清學(xué)檢測(cè)方法？,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn),原理人體感染了梅毒螺旋體后，組織受到破壞，釋放

4、出來的一種類脂成分，與梅毒螺旋體結(jié)合形成完全抗原，刺激機(jī)體在3周-4周產(chǎn)生類脂質(zhì)抗體（反應(yīng)素）。主要是IgM和IgG混合抗體?？贵w的作用無保護(hù)作用，治療監(jiān)測(cè)。未經(jīng)治療的病人，其血清內(nèi)的反應(yīng)素可長期存在。經(jīng)正規(guī)治療后，反應(yīng)素可以逐漸減少至轉(zhuǎn)為陰性。臨床上非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)為什么有定性和定量兩種檢測(cè)法？,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn),所有非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的抗原基本成分都是一樣方法包括： （1）快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片

5、試驗(yàn) (RPR) （2）甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST） （3）性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn) (VDRL)等?；境煞质切牧字?卵磷脂和膽固醇抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物，凝集成網(wǎng)狀沉淀顆粒被肉眼所見上述方法的敏感性和特異性都基本相似,試驗(yàn)特點(diǎn),原理和成分與試驗(yàn)相同 血清不需要滅活 不需要顯微鏡觀測(cè)結(jié)果 可作定量試驗(yàn) 有現(xiàn)成的試劑盒攜帶方便 操作簡單 價(jià)格便宜,操作要點(diǎn),儀器：水平旋轉(zhuǎn)儀。定性實(shí)驗(yàn)加樣：吸取

6、50ul血清(漿)放在卡片圈中，并均勻地涂布在整個(gè)圈內(nèi)加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號(hào)針頭加1滴抗原反應(yīng)：將卡片置水平旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn)8分鐘，立即在亮光下觀察結(jié)果3. 定量試驗(yàn)稀釋夜準(zhǔn)備：在圈內(nèi)加入50uL生理鹽水（根據(jù)需要確定稀釋度），勿將鹽水涂開。加樣：吸取50uL血清（漿）與各圈中鹽 水作系列稀釋，并涂布整個(gè)圈內(nèi)。下同定性試驗(yàn)。,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果判斷,RPR

7、 TRUST,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)臨床意義,早期梅毒硬下疳出現(xiàn)1周-2周后，血清可呈陽性。經(jīng)治療后血清滴度可下降并轉(zhuǎn)陰性，故可作為療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)或再感染的指征。為什么要做定量檢測(cè)？,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)臨床意義,一期梅毒1年后轉(zhuǎn)為陰性 二期梅毒2年后轉(zhuǎn)為陰性。 晚期梅毒 治療后血清滴度下降緩慢，2年后約50%病人血清反應(yīng)仍為陽性。,TRUST結(jié)

8、果解釋示意圖,,假陽性問題,假陽性：非梅毒患者的血清反應(yīng)呈陽性①技術(shù)性假陽性由于標(biāo)本的保存不當(dāng)（如細(xì)胞污染或溶血）、試劑質(zhì)量差或過期、或?qū)嶒?yàn)室操作錯(cuò)誤所造成。②生物學(xué)假陽性是由于患者有其他疾病或生理狀態(tài)發(fā)生變化，使梅毒血清試驗(yàn)出現(xiàn)陽性某些疾?。航Y(jié)核、瘧疾、肝病、紅斑狼瘡、流感、肺炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性心臟病、風(fēng)疹、系統(tǒng)性硬化癥等，疾病發(fā)展過程中釋放心磷脂到血液中呈假陽性。老年人。生理機(jī)能發(fā)生變化：少數(shù)孕婦也可發(fā)生生物學(xué)假

9、陽性。,梅毒假陽性反應(yīng)的處理,技術(shù)性假陽性反應(yīng)一般是由于操作錯(cuò)誤引起的假陽性反應(yīng)，經(jīng)過重復(fù)試驗(yàn)即可除外。 對(duì)生物學(xué)假陽性反應(yīng)，應(yīng)做TPHA（TPPA）等試驗(yàn)進(jìn)行排除。,前帶現(xiàn)象,指非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)中，有時(shí)血清中存在高濃度的抗體時(shí)出現(xiàn)的弱陽性、不典型或陰性反應(yīng)的結(jié)果，而臨床上又象二期梅毒，此時(shí)將血清稀釋后再進(jìn)行試驗(yàn)，出現(xiàn)了陽性的結(jié)果，該現(xiàn)象稱為前帶現(xiàn)象。處理：將血清稀釋后再進(jìn)行試驗(yàn)。,耐血清性（血清固定）,指經(jīng)抗梅毒治療后，

10、非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)在一定時(shí)期內(nèi)不陰轉(zhuǎn)。早期的耐血清性常與治療量不足或不規(guī)則治療、復(fù)發(fā)、再感染或有神經(jīng)系統(tǒng)梅毒等因素有關(guān)。,梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn),,梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)方法,梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn) (TPPA) 梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn) (TPHA) 梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA） 梅毒免疫層析法-梅毒快速檢測(cè) (RT) 熒光螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS） 化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA） 梅毒

11、螺旋體蛋白印跡試驗(yàn)（WB）,TPPA,TPPA試驗(yàn)用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒，此致敏顆粒與人血清中的抗梅毒螺旋體抗體結(jié)合，產(chǎn)生可見的凝集反應(yīng)，具有較高的敏感性和特異性。TPPA是目前WHO認(rèn)可的梅毒抗原血清學(xué)試驗(yàn)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，常用于新方法、新試劑評(píng)價(jià)的參照標(biāo)準(zhǔn)。,TPPA(TPHA)試驗(yàn)原理示意圖,,梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的臨床意義,一般情況下，一旦梅毒患者梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)呈陽性，即使經(jīng)過正規(guī)有效治療治，仍將終身陽性。所以TPPA

12、等試驗(yàn)不能作為療效觀察的指標(biāo)。作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)初篩陽性標(biāo)本的確證試驗(yàn)。TPPA等陽性不能區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染，應(yīng)結(jié)合非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行診斷。,TPPA結(jié)果解釋示意圖,,梅毒血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果解釋,梅毒血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果解釋,,梅毒檢測(cè)技術(shù)規(guī)范簡介,全國梅毒檢測(cè)技術(shù)規(guī)范,第一章 梅毒檢測(cè)樣品的采集和處理第二章 梅毒血清學(xué)檢測(cè)第三章 梅毒病原體顯微鏡檢測(cè)第四章 梅毒病原體核酸檢測(cè)第五章 實(shí)驗(yàn)室

13、生物安全第六章 梅毒檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理,第一章 樣品的采集和處理,血清、血漿、全血及腦脊液: 梅毒血清學(xué)檢測(cè)或核酸檢測(cè)皮損部位組織液、淋巴穿刺液: 梅毒病原體檢測(cè)或核酸檢測(cè)。,梅毒血清學(xué)試驗(yàn)適用范圍,,第二章 梅毒血清學(xué)檢測(cè),檢測(cè)目的:臨床診斷、血液篩查、流行病學(xué)監(jiān)測(cè)以臨床診斷為目的的檢測(cè)是為了確定梅毒感染的狀況。以血液篩查為目的的檢測(cè)是為了防止梅毒的經(jīng)血傳播。以流行病學(xué)監(jiān)測(cè)為目的的檢測(cè)是為了調(diào)查梅毒血清學(xué)感

14、染率和發(fā)病率。,梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)策略選擇,根據(jù)目的選擇檢測(cè)方法及檢測(cè)策略?？刹捎萌魏我活惷范狙鍖W(xué)檢測(cè)方法作為篩查試驗(yàn)。,以臨床診斷為目的檢測(cè)策略一,,以臨床診斷為目的檢測(cè)策略二,,策略一和策略二比較,,第三章 梅毒體病原學(xué)檢測(cè),檢測(cè)方法暗視野顯微鏡檢查鍍銀染色檢查,第四章 梅毒核酸檢測(cè),可對(duì)血漿、血清、皮損部位組織液、淋巴穿刺液及腦脊液等標(biāo)本的梅毒螺旋體核酸檢測(cè)在早期梅毒、神經(jīng)梅毒和先天梅毒等診斷，以及螺旋體現(xiàn)癥感染和既往感染鑒

15、別診斷中具有一定的價(jià)值可應(yīng)用于梅毒螺旋體的耐藥性監(jiān)測(cè)、菌株流行病學(xué)分型。,第五章 實(shí)驗(yàn)室生物安全,梅毒的生物危害 梅毒螺旋體屬第三類病原微生物，一般情況下對(duì)人、動(dòng)物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴(yán)重危害，傳播風(fēng)險(xiǎn)有限，實(shí)驗(yàn)室感染后很少引起嚴(yán)重疾病，是有有效治療和預(yù)防方法的致病微生物  梅毒相關(guān)檢測(cè)的生物安全級(jí)別 為了保證安全，對(duì)臨床和現(xiàn)場(chǎng)未知樣本的梅毒血清學(xué)檢測(cè)應(yīng)在符合Ⅱ級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室（BSL-2）要求的

16、實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。如有艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，可以在艾滋病抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。,第六章 實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理,質(zhì)量保證質(zhì)量評(píng)估試劑評(píng)價(jià),質(zhì)量保證,檢測(cè)方法和試劑的選擇 用于臨床診斷的檢測(cè)方法應(yīng)使用經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊(cè)批準(zhǔn)的試劑，應(yīng)選擇敏感性高、特異性好的試劑。性病參比實(shí)驗(yàn)室和省級(jí)性病中心實(shí)驗(yàn)室應(yīng)定期組織開展梅毒診斷試劑的臨床質(zhì)量評(píng)價(jià)和新方法與技術(shù)的評(píng)估。,質(zhì)量評(píng)價(jià),所有梅毒檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)參加外部質(zhì)量評(píng)價(jià)省級(jí)中心實(shí)驗(yàn)室應(yīng)參加國家級(jí)

17、職能工作考核和PT其他實(shí)驗(yàn)室應(yīng)參加省級(jí)職能工作考核和PT。,質(zhì)量評(píng)價(jià),考評(píng)組織單位根據(jù)PT考核結(jié)果、職能工作評(píng)價(jià)結(jié)果及對(duì)部分實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)場(chǎng)評(píng)價(jià)情況，匯總各實(shí)驗(yàn)室的最終考評(píng)結(jié)果，上報(bào)相關(guān)機(jī)構(gòu)?？荚u(píng)單位應(yīng)將考評(píng)得分及扣分原因反饋各參評(píng)實(shí)驗(yàn)室，以適當(dāng)?shù)姆绞皆谶m當(dāng)范圍內(nèi)公開發(fā)布考評(píng)結(jié)果。為合格者頒發(fā)合格證書。,小結(jié),1、非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)陽性往往是梅毒現(xiàn)癥感染者，臨床上即可開展治療。2、非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)定量試驗(yàn)可作為療效觀察