艾滋病、梅毒和乙肝實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

1、梅毒的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),甘肅省婦幼保健院臨床檢驗(yàn)中心趙翠生,綜合產(chǎn)前檢查服務(wù)+ 檢測(cè),孕產(chǎn)婦參加產(chǎn)前檢查服務(wù),檢測(cè)前信息,HBV 檢測(cè),梅毒檢測(cè),HIV 檢測(cè),全血細(xì)胞計(jì)數(shù)和其它檢測(cè),取血樣,2,梅毒的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),3,梅毒篩查檢測(cè),篩查檢測(cè)用于診斷產(chǎn)檢、臨產(chǎn)及分娩的孕產(chǎn)婦是否感染梅毒：梅毒血清學(xué)檢測(cè)篩查檢測(cè)應(yīng)具有較高的靈敏度和特異度操作簡(jiǎn)單、容易獲得、便宜盡可能在“當(dāng)日”獲得結(jié)果,4,篩查檢測(cè)何時(shí)使用何種檢測(cè)？,5,梅毒血清

2、學(xué)試驗(yàn)基本實(shí)驗(yàn)室設(shè)備,6,血清學(xué)試驗(yàn)檢測(cè)梅毒感染相關(guān)抗體 非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)（檢測(cè)非特異性抗體） RPR（快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)） TRUST（甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)） VDRL（性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)）梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)（檢測(cè)特異性梅毒螺旋體抗體） TPPA（梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)） ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)） POC（快速檢測(cè)、一站式檢測(cè)）,梅毒診斷檢測(cè),7,梅毒早期診斷的依據(jù)之一是病原

3、學(xué)檢測(cè)，即在組織或分泌物中檢測(cè)到蒼白螺旋體： 暗視野顯微鏡 鍍銀染色鏡檢,梅毒診斷檢測(cè),8,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn),梅毒螺旋體感染可產(chǎn)生非特異性抗體（非梅毒螺旋體抗體）非梅毒螺旋體抗體又稱(chēng)之為反應(yīng)素，是抗心磷脂等抗原的抗體隨菌體和宿主細(xì)胞的類(lèi)脂質(zhì)抗原量升高 除梅毒外，其他醫(yī)學(xué)情況會(huì)造成非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)假陽(yáng)性結(jié)果，包括結(jié)核、瘧疾、妊娠和風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、狼瘡及硬皮病等自體免疫學(xué)疾病,9,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)的

4、特點(diǎn),非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)： 快速、簡(jiǎn)便、便宜 敏感性和特異性較高 硬下疳后1-2周變?yōu)殛?yáng)性 可用于 篩查樣本 評(píng)估對(duì)治療的反應(yīng) 鑒別復(fù)燃還是再次感染,10,確保非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)質(zhì)量的關(guān)鍵點(diǎn),按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOPs）進(jìn)行操作推薦使用評(píng)價(jià)特性較好的試劑*按照統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)報(bào)告結(jié)果開(kāi)展實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控（QC）和參加室間能力驗(yàn)證（PT）,* 由中國(guó)疾病預(yù)防控制中心性病中心國(guó)家參比實(shí)驗(yàn)室提供,11,非梅毒

5、螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn),抗體滴度通常與疾病活動(dòng)度有關(guān)。治療后（可能幾個(gè)月）非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)通常轉(zhuǎn)變?yōu)椴环磻?yīng)如果用同一種實(shí)驗(yàn)，相同試驗(yàn)滴度4倍變化（如從1:16下降到1:4或從1:8上升到1:32）為臨床顯著變化有些病人，抗體滴度可始終處于較低水平，有時(shí)可持續(xù)終生（血清固定）注意：病人血清學(xué)監(jiān)測(cè)應(yīng)在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室使用同一種檢測(cè)方法（RPR、TRUST）進(jìn)行連續(xù)多次檢測(cè)；RPR和TRUST方法均有效，但檢測(cè)的滴度結(jié)果不能直接進(jìn)

6、行比較,12,治療后非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)抗體滴度變化的臨床意義,一期梅毒和二期梅毒： 成功治療，抗體滴度應(yīng)3個(gè)月后下降2倍6個(gè)月后下降4倍 一期梅毒：1年后抗體滴度轉(zhuǎn)陰 二期梅毒：2年后抗體滴度轉(zhuǎn)陰晚期梅毒： 治療后抗體滴度緩慢下降 50%的病人2年后抗體滴度仍為陽(yáng)性,13,梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn),梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn) 檢測(cè)梅毒螺旋體抗原特異性抗體 可用于確認(rèn)非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)的陽(yáng)性

7、 結(jié)果，排除其假陽(yáng)性 陽(yáng)性結(jié)果可持續(xù)存在，即使治療后仍可為陽(yáng)性。*,梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)與疾病的活動(dòng)度無(wú)關(guān)，不能用于鑒別現(xiàn)癥感染還是既往感染，也不能用于判斷療效,* 一期梅毒治療病人中，15%-25%可在2-3年后轉(zhuǎn)為血清學(xué)陰性,14,妊娠期梅毒檢測(cè),所有孕產(chǎn)婦應(yīng)進(jìn)行梅毒篩查檢測(cè)： 孕期盡早（如果可能，在孕早期時(shí)）以及 如果在分娩前/臨產(chǎn)時(shí)沒(méi)有篩查檢測(cè)結(jié)果，在分娩時(shí)檢測(cè) 篩查檢測(cè)可應(yīng)用以下任何一類(lèi)方法：非梅毒

8、螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)（滴度）或 梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn) 所有篩查檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性的孕產(chǎn)婦都應(yīng)用另外一類(lèi)檢測(cè)方法進(jìn)行復(fù)檢確認(rèn)是否為現(xiàn)癥梅毒 所有產(chǎn)婦及所生嬰兒出院前，產(chǎn)婦梅毒檢測(cè)結(jié)果都應(yīng)記錄在病歷中，以確保需要時(shí)給予治療,15,孕產(chǎn)婦梅毒檢測(cè)流程,陰性反應(yīng),陽(yáng)性反應(yīng),陰性反應(yīng),陽(yáng)性反應(yīng),16,HIV感染病人的梅毒血清學(xué)試驗(yàn),一些HIV感染病人，其梅毒血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果不典型，包括滴度超常高或超常低滴度不斷變動(dòng)如果臨床表現(xiàn)提示早期梅毒

9、，而血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果與此不一致，考慮病灶活檢 或暗視野顯微鏡檢查,注意：對(duì)于大多數(shù)HIV感染病人而言，梅毒血清學(xué)試驗(yàn)是診斷梅毒感染、隨訪觀察療效準(zhǔn)確、可靠的檢測(cè)方法,17,梅毒血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果的解釋,*包括結(jié)核、瘧疾、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或妊娠。,18,暴露嬰兒的梅毒檢測(cè),19,梅毒暴露嬰兒先天梅毒檢測(cè),母體非梅毒螺旋體和梅毒螺旋體IgG抗體可通過(guò)胎盤(pán)，所以應(yīng)謹(jǐn)慎地對(duì)嬰兒梅毒血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行解釋 嬰兒需要接受預(yù)防性治療還是規(guī)范的抗梅毒治

10、療應(yīng)根據(jù)：母親確診梅毒感染母親治療情況嬰兒梅毒感染的臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室或放射線檢查結(jié)果母親及嬰兒非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)滴度水平的比較（盡可能在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室使用相同的試驗(yàn)方法）,20,先天梅毒的診斷,先天梅毒的診斷標(biāo)準(zhǔn)：梅毒暴露嬰兒具有以下條件之一： 任何先天梅毒臨床表現(xiàn)暗視野顯微鏡檢梅毒螺旋體陽(yáng)性（+）梅毒螺旋體IgM抗體陽(yáng)性*RPR/TRUST檢測(cè)陽(yáng)性，滴度比母親分娩前最近一次 滴度高4倍及以上RPR/T

11、RUST監(jiān)測(cè)隨訪中，任何一次滴度不下降或反 而上升滿18月齡后，TPPA檢測(cè)陽(yáng)性,* IgM抗體反映近期感染，可幫助鑒別嬰兒先天梅毒，但我國(guó)尚不能廣泛開(kāi)展,21,梅毒暴露嬰兒的評(píng)估,梅毒暴露嬰兒：嬰兒RPR檢測(cè) 嬰兒RPR檢測(cè)不能使用臍帶血，因其易被母體 血液 污染，從而出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果檢查先天梅毒臨床表現(xiàn)： 非免疫性水腫、黃疸、肝脾大、鼻炎、皮疹、 末端肢體假性麻痹對(duì)可疑病灶或體液進(jìn)行暗視

12、野顯微鏡檢查,22,先天梅毒檢測(cè)流程,23,梅毒,早期梅毒診斷可根據(jù)在組織或分泌物樣本中通過(guò)顯微檢測(cè)到蒼白螺旋體而診斷應(yīng)用梅毒血清學(xué)試驗(yàn)進(jìn)行梅毒篩查非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)檢測(cè)梅毒感染過(guò)程中產(chǎn)生的非特異抗體。滴度通常與疾病的活動(dòng)度有關(guān)，因此可用于監(jiān)測(cè)對(duì)治療的反應(yīng)梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)檢測(cè)對(duì)抗梅毒螺旋體抗原的特異性抗體，可用于確認(rèn)臨床診斷或非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)的陽(yáng)性結(jié)果，可反映任何階段的梅毒暴露先天梅毒的診斷復(fù)雜，應(yīng)根據(jù)

13、：母親梅毒感染狀態(tài)母親梅毒治療情況嬰兒梅毒感染的臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室或X線檢查結(jié)果母親、嬰兒非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)滴度水平的比較隨訪,24,HIV和HBV的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),HIV和HBV篩查檢測(cè),篩查檢測(cè) 用于診斷產(chǎn)檢、臨產(chǎn)及分娩的孕產(chǎn)婦是否感染 HIV和HBVHIV抗體檢測(cè)乙肝表面抗原（HBsAg）檢測(cè) 篩查檢測(cè)應(yīng)具有較高的靈敏度和特異度操作簡(jiǎn)單、容易獲得、便宜盡可能在“當(dāng)日”獲得結(jié)果,26,何時(shí)使用何

14、種檢測(cè)？,27,HIV試驗(yàn)和檢測(cè),28,HIV檢測(cè)：抗體檢測(cè),一個(gè)人感染了HIV病毒后，體內(nèi)將產(chǎn)生特異性抗體 對(duì)抗HIV病毒* 。 HIV抗體通常在感染后4 – 6周出現(xiàn)，但也有時(shí)也會(huì) 在感染后3個(gè)月才出現(xiàn)。 從感染HIV病毒到出現(xiàn)特異的HIV抗體的一段時(shí)期 稱(chēng)為“窗口期”。,標(biāo)準(zhǔn)的HIV診斷檢測(cè)是識(shí)別HIV抗體* *,注意： *與其他大多數(shù)疾病不同，HIV抗體沒(méi)有保護(hù)性作用。,29,HIV抗體檢

15、測(cè)類(lèi)型,30,HIV檢測(cè)：病毒核酸檢測(cè),這些檢測(cè)檢測(cè)HIV感染者血液或血漿中的病毒必須由經(jīng)過(guò)專(zhuān)門(mén)培訓(xùn)的實(shí)驗(yàn)室人員操作實(shí)驗(yàn)室需有資質(zhì)，并配備專(zhuān)門(mén)設(shè)備昂貴，不是針對(duì)所有人進(jìn)行的常規(guī)檢測(cè)方法PCR（多聚酶連反應(yīng)法）檢測(cè)HIV DNA定性檢測(cè)血液中是否含有病毒，用于診斷 18月齡內(nèi)嬰兒是否感染HIVHIV RNA定量檢測(cè)病毒載量，即血漿中的病毒數(shù)量， 用于監(jiān)測(cè)對(duì)抗病毒治療的反應(yīng)。,31,HIV篩查檢測(cè)結(jié)果的含義,HI

16、V篩查檢測(cè)結(jié)果“陰性(-)”： 受檢者沒(méi)有感染HIV或者受檢者已經(jīng)感染了HIV，但處于窗口期：3個(gè)月后 再次進(jìn)行檢測(cè)HIV篩查檢測(cè)結(jié)果“陽(yáng)性(+)”： 病人可能已經(jīng)感染HIV, 但應(yīng)再次重復(fù)檢測(cè),32,HIV確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果的含義,如果篩查檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性，兩次重復(fù)檢測(cè)中1次 或2次檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，需要進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn) 免疫印跡法（WB）確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果：陽(yáng)性病人確認(rèn)感染HIV陰性受檢者沒(méi)有感染H

17、IV不確定結(jié)果為“不確定”受檢者必須在4周后再次采血，重復(fù)前述所有步驟進(jìn)行檢測(cè),33,中國(guó)預(yù)防艾滋病、梅毒和乙肝母嬰傳播HIV檢測(cè)流程,在產(chǎn)前檢查服務(wù)中開(kāi)展整合的檢測(cè)咨詢所采用的HIV檢測(cè)流程,34,產(chǎn)時(shí)HIV抗體檢測(cè)流程,中國(guó)預(yù)防艾滋病、梅毒和乙肝母嬰傳播HIV檢測(cè)流程,35,兒童HIV 檢測(cè),36,HIV暴露嬰兒和兒童的HIV抗體檢測(cè),不是所有HIV感染母親所生兒童都會(huì)感染HIV，但是如果對(duì)12-18個(gè)月以內(nèi)的嬰兒進(jìn)行HIV抗

18、體檢測(cè)，所有HIV感染母親所生嬰兒都將是HIV檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性。 即使嬰兒并沒(méi)有感染HIV 由于母體自身抗體可通過(guò)胎盤(pán)進(jìn)入胎兒體內(nèi),母體傳入的抗體可在嬰兒體內(nèi)持續(xù)18個(gè)月，所以12-18月齡以內(nèi)的嬰兒不能應(yīng)用抗體檢測(cè)方法進(jìn)行診斷。,37,嬰兒感染早期診斷（EID）HIV病毒檢測(cè)（DNA-PCR）,HIV病毒檢測(cè)（DNA-PCR） 檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的HIV病毒， 能夠檢測(cè)低至1 – 10 拷貝前病毒DNA，以及 可在HIV

19、暴露嬰兒出生后6周內(nèi)診斷HIV感染 用于HIV暴露嬰兒HIV感染早期診斷（EID）,38,應(yīng)用DNA-PCR方法進(jìn)行嬰兒感染早期診斷（EID）（1）,如果可以開(kāi)展HIV DNA-PCR檢測(cè)，應(yīng)用干血斑（DBS）在嬰兒6周齡時(shí)進(jìn)行PCR檢測(cè)。如果PCR檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性 盡快再次采血再次進(jìn)行DNA-PCR檢測(cè)如果第二次PCR檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性，嬰兒確定感染HIV如果PCR檢測(cè)結(jié)果陰性 嬰兒出生后3

20、個(gè)月再次進(jìn)行PCR檢測(cè),39,應(yīng)用DNA-PCR方法進(jìn)行嬰兒感染早期診斷（EID）（2）,出生后3個(gè)月再次進(jìn)行HIV DNA-PCR檢測(cè)如果PCR檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性 盡快再次采血再次進(jìn)行DNA-PCR檢測(cè)如果第二次PCR檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性，嬰兒確定感染HIV如果PCR檢測(cè)結(jié)果陰性 嬰兒視為未感染HIV考慮在嬰兒滿12月齡時(shí)進(jìn)行HIV抗體檢測(cè)（如有必要，在18月齡時(shí)再次進(jìn)行檢測(cè)）,檢測(cè)結(jié)果陰性的嬰兒接受母乳喂養(yǎng)，必須在停止母

21、乳喂養(yǎng)后6周再次進(jìn)行PCR檢測(cè)，以確保嬰兒沒(méi)有在母乳喂養(yǎng)期間感染HIV。,40,嬰兒HIV感染早期診斷流程,41,HIV暴露嬰兒/兒童的HIV抗體檢測(cè),所有HIV感染母親所生兒童，在出生后6周或3個(gè)月未接受早期感染檢測(cè)者，應(yīng)進(jìn)行HIV抗體檢測(cè)。檢測(cè)時(shí)間：滿12月齡 和滿18月齡（必要時(shí)，見(jiàn)HIV抗體檢測(cè)流程）出生后3個(gè)月（接受早期感染檢測(cè)者）檢測(cè)結(jié)果為陰性的兒童也應(yīng)接受HIV抗體檢測(cè),滿18月齡HIV抗體檢測(cè)陽(yáng)性，可確認(rèn)兒童

22、HIV感染。,42,HIV暴露兒童HIV抗體檢測(cè)流程,43,HIV感染的實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè),44,HIV感染的實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè),實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)主要用于：決定開(kāi)始抗病毒治療還是預(yù)防性應(yīng)用抗病毒藥物是否有抗病毒治療指征？ 效果監(jiān)測(cè)抗病毒治療有效嗎？毒性監(jiān)測(cè)抗病毒藥物是否引起了其他問(wèn)題？,45,CD4+ T淋巴細(xì)胞是HIV病毒攻擊的靶細(xì)胞 CD4+ T淋巴細(xì)胞檢測(cè)用于： 決定開(kāi)始抗病毒治療還是預(yù)防性應(yīng)用抗病毒藥物 為判斷抗病毒治療成功或失敗

23、提供定量依據(jù) 對(duì)調(diào)整抗病毒治療方案提供指導(dǎo) 孕期每3個(gè)月及產(chǎn)后4 – 6周應(yīng)進(jìn)行CD4+ T淋巴細(xì)胞檢測(cè) 急性感染時(shí)可適當(dāng)推遲檢測(cè)，(因?yàn)樵诩毙愿腥酒冢?CD4+ T淋巴 細(xì)胞通常會(huì)下降）,CD4+ T淋巴細(xì)胞檢測(cè),46,病毒載量測(cè)量血漿中的病毒數(shù)量 病毒載量檢測(cè)可用于： 是抗病毒治療失敗早期、最可靠的標(biāo)記物監(jiān)測(cè)對(duì)抗病毒治療的反應(yīng) 診斷HIV感染后和

24、孕晚期各進(jìn)行一次病毒載量檢測(cè),病毒載量（RNA-PCR）檢測(cè),47,HIV感染孕產(chǎn)婦常規(guī)實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)（1）,48,HIV感染孕產(chǎn)婦常規(guī)實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)（2）,49,HBV感染的檢測(cè),50,妊娠期HBV感染篩查,所有孕產(chǎn)婦均應(yīng)在孕期盡早接受HBsAg檢測(cè)篩查是否感染HBV 如果分娩前尚未有檢測(cè)結(jié)果，應(yīng)在分娩前盡快進(jìn)行檢測(cè) 如果HBsAg檢測(cè)陽(yáng)性，有條件可考慮進(jìn)行其他HBV標(biāo)記物檢測(cè)。 注意，暴露嬰兒的處置不受母親其他HBV標(biāo)記

25、物檢測(cè)結(jié)果的影響,51,乙肝標(biāo)記物列表,52,HBV暴露嬰兒的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),HBsAg陽(yáng)性母親所生嬰兒，出生時(shí)應(yīng)接受乙肝疫苗接種，并在完成全部3劑乙肝疫苗接種后的 6個(gè)月接受HBsAg和抗HBs抗體檢測(cè)（即出生后12個(gè)月時(shí)）結(jié)果解釋?zhuān)?如果HBsAg陽(yáng)性并持續(xù)6個(gè)月，嬰兒慢性感染 如果抗Hbs抗體陽(yáng)性（>1000萬(wàn)IU/ml），嬰 兒有免疫保護(hù) 如果HBsAg陰性和抗HBs抗體< 1000萬(wàn)IU/ml，

26、 嬰兒應(yīng)再次接受3劑乙肝疫苗接種,53,要點(diǎn)-HIV,使用快速篩查試驗(yàn)診斷HIV感染。篩查檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性 進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。 HIV感染抗病毒治療應(yīng)根據(jù)： CD4+ T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)結(jié)果，反映HIV對(duì)免疫系統(tǒng) 的影響 HIV病毒載量檢測(cè)結(jié)果，反映血液中HIV病毒的數(shù)量 如果有條件，應(yīng)用 PCR方法檢測(cè)HIV-DNA診斷嬰兒 是否HIV感染 兒童滿12-