樣品采集及注意事項(xiàng)

1、樣品采集及注意事項(xiàng),,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,樣 品,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,一、樣品存在的問(wèn)題,樣品的真實(shí)性（假樣品，一個(gè)或幾個(gè)樣品分開(kāi)、混合），浪費(fèi)檢測(cè)試劑。樣品的質(zhì)量（溶血，腐敗，反復(fù)凍融）。采樣單填寫(xiě)的信息不全（畜禽日齡，免疫情況等）組織樣品采集的太少，不具有代表性。各種類的樣品用一個(gè)采樣單填寫(xiě)。樣品編號(hào)不能追溯回去。樣品編號(hào)沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)常是從1開(kāi)始，時(shí)間久了無(wú)法區(qū)分。樣品采集后沒(méi)有及時(shí)處理，導(dǎo)致溶血等。,益陽(yáng)

2、市獸醫(yī)局,溶血程度不一的血清樣,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,二、樣品的種類,血液樣品：血清，全血抗凝血，血漿組織樣品：心肝脾肺腎腦，淋巴結(jié)，扁桃體糞便樣品：新鮮，濕潤(rùn)的生殖道和精液樣品皮膚樣品：皮屑分泌液和滲出液樣品：舌面或蹄部的水泡液,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,血液樣品,血液：最常用的樣品，可以做血清學(xué)試驗(yàn)的樣品，也可以作為病原學(xué)試驗(yàn)的樣品。全血（抗凝血）：抗凝劑有肝素，阿氏液，枸櫞酸鈉和4%EDTA，或者用玻璃珠，脫纖維蛋白。血清：不加抗凝劑的

3、血液，在室溫靜置2~4h（或37℃1h）待血液完全凝固后，析出上清即為血清。血漿：抗凝血混勻后，靜置，上清即為血漿。,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,檢測(cè)樣品的分類,細(xì)菌學(xué)檢測(cè)樣品：采集發(fā)病典型或剛死亡的整體動(dòng)物送實(shí)驗(yàn)室為最好。無(wú)菌采集，冷藏，保存液中不加任何抗生素。 病毒學(xué)檢測(cè)樣品：病毒檢測(cè)應(yīng)在動(dòng)物病初、體溫升高期間采集。以組織臟器、血液、糞便等樣品為主 。冷藏或冷凍，保存液中加抗生素。血清學(xué)檢測(cè)樣品：靜脈采血3 ml左右，注射器內(nèi)留一定空間，靜

4、置過(guò)程或已凝固的血液應(yīng)低溫冷凍，以免溶血。短時(shí)間內(nèi)，可在4度左右保存；如時(shí)間較長(zhǎng)應(yīng)凍結(jié)保存，注意不能反復(fù)凍融.病理學(xué)檢測(cè)樣品：保證樣品新鮮，應(yīng)選擇病變最典型最明顯的部位，且連同部分健康組織一并采集。 浸泡于酒精或福爾馬林溶液中，冷藏保存和運(yùn)輸。,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,幾種重要疫病的采樣時(shí)機(jī),禽流感、新城疫：發(fā)病初期采全血，泄殖腔\咽喉棉拭子；后期采集新鮮糞便；剖剪后的氣管，肺臟，腎臟等口蹄疫：全血，水泡皮，水泡液，O/P液及口腔分泌物和咽喉

5、棉拭子豬瘟，豬偽狂犬，藍(lán)耳?。喝?，組織病料：肺臟，脾臟，淋巴結(jié)，扁桃體，流產(chǎn)胎衣等，新鮮精液或冷凍精液豬流感：在發(fā)熱期采集鼻咽棉拭子和肺組織病料。,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,三、高品質(zhì)樣品的特征,樣品標(biāo)記明確,樣品新鮮,采樣單填寫(xiě)規(guī)范,樣本\樣品數(shù)量適當(dāng),益陽(yáng)市獸醫(yī)局,四、如何得到高質(zhì)量的樣品,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,1、采樣前的準(zhǔn)備-器具,采樣工具：一次性注射器，解剖刀，剪刀，鑷子，酒精燈，酒精棉，棉簽，保定動(dòng)物專用工具樣品存放用具：塑料離心

6、管（1.5，2，5ml），自封口樣品袋，試管架，塑料樣品盒，膠布，封口膜，冰袋。防護(hù)用具：一次性手套，鞋套，口罩，隔離衣等。記錄用具：不干膠標(biāo)簽、圓珠筆、油性記號(hào)筆、采樣單、記錄本等,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,2、采樣前準(zhǔn)備—采樣技術(shù),血液樣品：牛、馬、羊從頸靜脈或尾靜脈采血；豬從前腔靜脈采血，用量少時(shí)也可從耳靜脈抽??；家禽從翅靜脈抽取。棉拭子樣品：泄殖腔，咽喉，鼻腔水泡皮及水泡液：O/P液：保定，左手拉出舌頭或從嘴的一側(cè)按住舌頭，右手緩

7、慢放入探杯。組織樣品：解剖，潔凈取樣。,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,血液樣品的分離方法,抗凝血：采血前在試管或注射器內(nèi)按比例加抗凝劑，運(yùn)輸時(shí)必須減少震蕩以免溶血。非抗凝血：分離血清血清析出好的因素：容器：玻璃試管優(yōu)于塑料離心管；斜面：與空氣接觸面要大。溫度：最佳溫度是體溫；時(shí)間：室溫靜置最短2小時(shí)；離心：轉(zhuǎn)速要低，2000轉(zhuǎn)。膠凍狀血清的成因：采血前剛喂食(沒(méi)有空腹)；凝血時(shí)間不夠；脂肪血（營(yíng)養(yǎng)過(guò)剩）,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,糞便、棉拭子和O/P液樣品

8、的采集,泄殖腔拭子的采集：將棉拭子插入泄殖腔內(nèi)約1.5-2cm,旋轉(zhuǎn)后沾上糞便。 咽喉拭子、鼻腔拭子的采集：將滅菌的干棉拭子插入口腔至咽的后部或鼻腔，輕輕擦拭并慢慢旋轉(zhuǎn)將拭子拔出，將棉拭子放入緩沖液內(nèi)。 O/P液是從動(dòng)物食道/咽喉刮取的黏膜樣品，用特制的食道探環(huán)刮取黏膜，放入樣品保存液中。,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,水泡液及水泡皮的采集,用75%酒精消毒水泡表皮，用滅菌生理鹽水擦去酒精，用注射器穿刺吸取水泡液，置于含抗生素的PBS緩沖液中；然后

9、用剪刀將水泡皮剪下，放入含抗生素的PBS緩沖液中。,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,3、采樣的準(zhǔn)確性和時(shí)效性,代表性：應(yīng)該考慮到整個(gè)監(jiān)測(cè)區(qū)域的地理分布，選取有代表性的點(diǎn)。如動(dòng)物品種分布、日齡、飼養(yǎng)密度、地勢(shì)特點(diǎn)、交通特點(diǎn)、動(dòng)物遷徙習(xí)性等因素。如禽流感采樣時(shí)，疫區(qū)交接處，野鳥(niǎo)遷徙途徑，水禽家禽混合飼養(yǎng)處等。 時(shí)效性：如抗體監(jiān)測(cè)，免疫后14天左右才可以采集；監(jiān)測(cè)病原時(shí)，注意排毒時(shí)間和病原的易嗜細(xì)胞和組織，在監(jiān)測(cè)時(shí)要根據(jù)不同時(shí)期，采集不同部位的組織進(jìn)行檢測(cè)。

10、如口蹄疫病毒首先是在咽喉部和肺上皮細(xì)胞擴(kuò)增，然后進(jìn)入血液，通過(guò)分泌物、水泡排毒。,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,樣本\樣品的數(shù)量,樣本：總體中的一部分代表；樣品：檢測(cè)的原始材料。概率抽樣（隨機(jī)抽樣）：是按照隨機(jī)原則進(jìn)行抽樣，不加主觀因素，組成總體的每個(gè)單位都有被抽中的概率（非零概率）比例抽樣：按養(yǎng)殖規(guī)模成比例抽樣。多階段抽樣：全市分區(qū)，每個(gè)區(qū)隨機(jī)選縣，每個(gè)縣選鄉(xiāng)鎮(zhèn)，每個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)選養(yǎng)殖場(chǎng)。樣本量，符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，決定因素：疫病在群體中的發(fā)生率，可信水

11、平，檢測(cè)方法 的敏感性和特異性。樣品的量要足夠檢測(cè)使用。,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,4.1樣品的包裝和編號(hào),單個(gè)樣品的包裝動(dòng)物血清、全血、棉拭子、水泡液，加有PBS的糞便等液體樣品用用1.5ml，2ml，5ml帶蓋的塑料離心管；組織病料等固體樣品用自封口樣品袋，或放入1.5ml及2ml塑料離心管；每次送樣的同一種樣品進(jìn)行編號(hào)，每個(gè)樣品都要有唯一編號(hào)，標(biāo)識(shí)清楚，不易丟失。每組樣品的包裝以鎮(zhèn)或每個(gè)采樣點(diǎn)為單位分組，每組一個(gè)大包裝，用自封口樣

12、品袋包裝，并貼有標(biāo)簽，注明樣品名、樣品編號(hào)、采樣日期等。,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,4.2樣品的記錄,單個(gè)樣品的小塑料離心管外用油性記號(hào)筆標(biāo)記每組樣品自封袋外用鋼筆填寫(xiě)樣品標(biāo)簽和封條編號(hào)與采樣單一致，具有唯一性和可追溯性。填寫(xiě)采樣單：被采樣畜主的聯(lián)系方式和采樣人的聯(lián)系方式；被采樣動(dòng)物的健康狀況和免疫狀況；被采樣動(dòng)物的聯(lián)系方式（畜種，日齡，標(biāo)識(shí)號(hào)等）；樣品運(yùn)輸方式；日期，簽名（采樣人，畜主）。每類樣品要求填寫(xiě)一份采樣單。,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,5、樣

13、品追溯,樣品編號(hào)和填寫(xiě)采樣單目的是對(duì)檢測(cè)結(jié)果的追溯?！秳?dòng)物防疫法》規(guī)定動(dòng)物免疫抗體監(jiān)測(cè)、動(dòng)物疫病病原監(jiān)測(cè)、動(dòng)物疫病應(yīng)急流行病學(xué)調(diào)查等均實(shí)行可追溯制度。追溯內(nèi)容：家禽來(lái)源、飼養(yǎng)周期、防疫情況、免疫程序、疫苗及獸藥的使用情況?？贵w監(jiān)測(cè)要求追溯到每棟，每舍。病原學(xué)監(jiān)測(cè)必須追溯到每只，每頭。,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,6.1樣品的保存,血清：4-8℃冷藏，不超過(guò)2周；抗凝血： 4-8℃冷藏，不超過(guò)1周；病毒檢驗(yàn)材料：短時(shí)間可冷藏，否則須-20

14、℃或-70 ℃以下保存，無(wú)條件的可置滅菌50%甘油-PBS液中冷藏，不宜反復(fù)凍融。細(xì)菌檢驗(yàn)病料：冷藏，不宜冷凍，可置滅菌的30%甘油-PBS液/鹽水中冷藏。 所有凍存樣品忌反復(fù)凍融,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,6.2樣品的運(yùn)輸,關(guān)鍵是：容器（密閉）溫度（低溫）時(shí)間（越快越好）容器：密封容器，防止?jié)B漏，造成環(huán)境污染或疫情擴(kuò)散。溫度：樣品應(yīng)在低溫下保存和運(yùn)輸（放置冰塊）。（拭子樣品和組織樣品應(yīng)作暫時(shí)的冷藏或冷凍處理，然后運(yùn)送。血清樣品，若 24

15、h內(nèi)運(yùn)達(dá)實(shí)驗(yàn)室，冷藏運(yùn)輸；若超過(guò) 24h，要先冷凍后，再冷藏運(yùn)輸，途中不能超過(guò) 48h。）時(shí)間：若能在4h內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室，可用冰袋冷藏運(yùn)輸。如果超過(guò)4h，應(yīng)置于-30 ℃冷凍處理，再在保溫箱內(nèi)加冰袋運(yùn)輸，在24h內(nèi)送到。若 24h不能送到實(shí)驗(yàn)室，則運(yùn)輸過(guò)程中環(huán)境溫度應(yīng)保持在-20 ℃以下（干冰）。,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,五、采樣時(shí)注意事項(xiàng),注意人畜共患?。鹤龊米陨矸雷o(hù)，不直接接觸動(dòng)物樣品。注意人為的傳播疫?。翰蓸庸ぞ吆头雷o(hù)用品，隨身帶走，統(tǒng)一

16、消毒。采樣動(dòng)物的健康狀況（飲食，免疫，用藥等）采集的病料應(yīng)該包裝好，防止污染環(huán)境，防止無(wú)意的傳播疾病，做好環(huán)境消毒和病害肉的處理。對(duì)于突發(fā)事件中急性死亡的動(dòng)物，如懷疑是炭疽，不能隨意解剖，可以采血，或局部解剖做觸片。,采 血 方 法,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,一、禽的采血方法,1. 雛雞心臟采血 左手抓雞，術(shù)者手持采血針，平行頸椎從胸腔前口插入回抽見(jiàn)有回血時(shí)，即把針芯向外拉使血液流入采血針。 2. 成年禽心臟采血 成年

17、禽只采血可取側(cè)臥或仰臥保定。 (1)側(cè)臥保定采血 助手抓住禽兩翅及兩腿，右側(cè)臥保定，在觸及心搏動(dòng)明顯處，或胸骨脊前端至背部下凹處連線的1／2處消毒，垂直或稍向前方刺人2～3厘米，回抽見(jiàn)有回血時(shí)，即把針芯向外拉使血液流入采血針。 (2)仰臥保定采血 胸骨朝上，用手指壓離嗉囊，露出胸前口，用裝有長(zhǎng)針頭的注射器，將針頭沿其鎖骨俯角刺入，順著體中線方向水平穿行，直到刺入心臟。,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,3. 翅靜脈采血 在翅下靜脈處消毒，手持采

18、血針，從無(wú)血管處向翅靜脈叢刺入，見(jiàn)有血液回流，即把針芯向外拉使血液流入采血針。也可保定禽只，使翅膀展開(kāi)，露出腋窩部，用消毒棉消毒。拇指壓近心端，待血管怒張后，用裝有細(xì)針頭的注射器，由翼根向翅方向平行刺入靜脈，方向反了？放松對(duì)近心端的按壓，緩慢抽取血液。采血完畢用棉球按壓止血。,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,二、豬的采血方法,1. 耳緣靜脈采血站立保定，助手用力在耳根捏壓靜脈的近心端，手指輕彈后，用酒精棉球反復(fù)涂擦耳靜脈使血管怒張。沿血

19、管刺入，見(jiàn)有血液回流，緩慢抽取所需量血液或接入真空采血管。用棉球按壓止血。2. 前腔靜脈采血 (1) 站立保定，保定器保定讓豬頭仰起，露出右腋窩，從右側(cè)向心臟方向刺人，回抽見(jiàn)有回血時(shí)，即把針芯向外拉使血液流入采血針。 (2)仰臥保定，把前肢向后方拉直。如何操作？是否向上向外一般用裝有20號(hào)針頭的注射器采血，其穿刺部位在胸骨端與耳基部連線上胸骨端旁2厘米的凹陷處，向后內(nèi)方與地面呈60度角刺入2～3厘米，當(dāng)進(jìn)入約2厘米時(shí)可一邊刺入一

20、邊回抽針管內(nèi)芯；刺入血管時(shí)即可見(jiàn)血進(jìn)入針管內(nèi)，采血完畢，局部消毒。,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,豬前腔靜脈采血,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,1.選取合適的針筒和針頭,通常都是用一次性5毫升注射用針筒。由于豬的大小不同，前腔靜脈的深淺不一樣，要求使用的針頭也是不一樣的。 若針頭太短，刺不到前腔靜脈；針頭太長(zhǎng)，可能刺穿整條前腔靜脈，也是采不到血的。 種公母豬選用16#×100毫米針頭；

21、 30千克以上的中豬選擇用12#×72毫米針頭； 10～30千克小豬選用9#×50毫米針頭； 10千克以下乳豬選用9#×30毫米針頭。,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,2.豬只的保定,種公母豬需要用保定繩固定，并且要求盡可能吊得高一點(diǎn)，使豬的頭頸與水平面呈 30度以上（如圖），既方便采血人員察看采血部位，又使前腔靜脈向外突出，靜脈血充脹。 20千克以上的中大豬，由 1～2名飼養(yǎng)員用捉豬

22、器(或保定繩)拉住，頭昂起，偏向右側(cè)(如圖)。 20千克以下的小豬，可由 1～2名飼養(yǎng)員抓起、倒立，后背緊靠在欄架上（如圖）。,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,3.找準(zhǔn)下針部位,豬的前腔靜脈越往頭部越淺，但也越細(xì)；越靠胸部越粗，但也越深，所以，采血應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)牟课?。若小豬采血的部位太靠頭部，血管太細(xì)，很難扎中，即使扎中了也很難抽出血，所以，小豬的采血部位應(yīng)稍靠后。中大豬和種母豬血管比較粗，靠胸部較深，針頭夠不到血管，所以，應(yīng)略靠前。20

23、千克以下的小豬應(yīng)采兩前肢與氣管交匯處種公母豬和 20千克以上的中大豬可選頸部最低凹處。,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,4.下針和抽血,小豬：對(duì)準(zhǔn)以上描述的部位，用針垂直刺入，拉緊針筒活塞，若針頭扎中前腔靜脈，可見(jiàn)血液自血管源源流出，一直抽取到所需的血量即可。如果抽不到血液，說(shuō)明針頭沒(méi)有扎中血管，此時(shí)可上下移動(dòng)針頭，直到針筒中見(jiàn)血液流出為止。種公母豬和中大豬：對(duì)準(zhǔn)下針部位，使針頭偏向氣管約 15度方向下針，拉緊針筒活塞，若針頭扎中前腔靜脈，可見(jiàn)血液流出

24、。如果不見(jiàn)血液流出，說(shuō)明針頭沒(méi)有扎中，有可能是前腔靜脈較深，可用手頂緊針筒，使針頭扎深一點(diǎn)。若仍采不到血，可以把針頭往后稍退，或左右搖擺針頭，直到有血流出為止。實(shí)際上，操作熟練后，針頭有沒(méi)有扎中是可以感覺(jué)到的，當(dāng)針頭扎破靜脈壁時(shí)，可以感覺(jué)到輕微的“撲”的一聲。,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,母豬前腔靜脈采血,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,中大豬前腔靜脈采血,兩人配合,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,中大豬前腔靜脈采血,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,仔豬前腔靜脈采血,三人配合,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,仔豬前腔靜脈

25、采血,益陽(yáng)市獸醫(yī)局,三、牛、羊的采血方法,1. 牛、羊頸靜脈采血 將動(dòng)物保定，稍抬頭頸，于頸靜脈溝上1／3與中1／3交界部剪毛消毒，一手拇指按壓采血部位下方頸靜脈溝血管，促使頸靜脈怒張，另一手執(zhí)針頭，與皮膚呈45度角，由下向上方刺入，血液順器壁流入容器內(nèi)，防止氣泡產(chǎn)生。待血量達(dá)到要求后，拔下針頭，用消毒棉球按壓針眼，輕按止血。 2. 牛尾靜脈采血： 固定動(dòng)物，使牛尾往上翹，手離尾根部約30厘米。在離尾根10厘米左右中點(diǎn)凹陷處，先