球孢白僵菌α-葡萄糖苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(BbATG1)的功能分析與熱激響應(yīng)基因的分離鑒定.pdf

1、球孢白僵菌對(duì)環(huán)境溫度變化的響應(yīng)，是影響其孢子制劑對(duì)田間害蟲(chóng)防治效果穩(wěn)定性的關(guān)鍵因素之一。本研究開(kāi)展了球孢白僵菌抗逆相關(guān)基因BbAGT1編碼的α-葡萄糖苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的功能分析，并對(duì)該菌熱激響應(yīng)相關(guān)基因進(jìn)行了分離篩選，主要結(jié)果如下：
　　 球孢白僵菌BbAGT1基因克隆、敲除及功能分析從球孢白僵菌Bb2860菌株中克隆了BbAGT1基因，該基因全長(zhǎng)1883 bp，含四個(gè)外顯子和三個(gè)內(nèi)含子，編碼565個(gè)氨基酸，編碼蛋白的預(yù)測(cè)分子量為63

2、.65 kDa，等電點(diǎn)約為5.52。BbAGT1擁有MFS轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族的底物結(jié)合位點(diǎn)，與21種已知真菌的α-葡萄糖苷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的同源性高達(dá)90‰-99％。通過(guò)根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的真菌轉(zhuǎn)化方法構(gòu)建使該基因缺失的敲除菌株，經(jīng)PCR及Southern雜交鑒定后進(jìn)行表型分析。結(jié)果顯示，同野生株相比，基因敲除株△BbAGT1的孢子萌發(fā)速率、菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢量分別下降66％、64％及90％，分生孢子抗氧化、耐48。C高溫脅迫、耐UV-B紫外輻射的能力以及對(duì)

3、蚜蟲(chóng)的毒力分別下降27％、22％、28％及14％。由此證明，BbAGT1基因在球孢白僵菌抗逆力及侵染力的利用過(guò)程中起到了重要的作用。
　　 球孢白僵菌熱激響應(yīng)基因的篩選采用抑制消減雜交技術(shù)構(gòu)建Bb2860菌株熱脅迫下的差異表達(dá)cDNA文庫(kù)，從中篩選出28個(gè)熱激響應(yīng)上調(diào)基因。通過(guò)比對(duì)分析，大部分基因與已知功能基因如物質(zhì)運(yùn)輸、基礎(chǔ)代謝及脅迫響應(yīng)類(lèi)基因具高度同源性。運(yùn)用熒光實(shí)時(shí)定量PCR測(cè)定其中的12個(gè)基因在40℃熱激15、30、60