水產(chǎn)養(yǎng)殖學(xué)畢業(yè)論文-不同干露時間對三疣梭子蟹非特異性免疫系統(tǒng)的影響

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文</b></p><p><b>　?。?0 屆）</b></p><p>　　不同干露時間對三疣梭子蟹非特異性免疫系統(tǒng)的影響</p><p>　　所在學(xué)院 </p><p>　　專業(yè)班級

2、 水產(chǎn)養(yǎng)殖學(xué) </p><p>　　學(xué)生姓名 學(xué)號 </p><p>　　指導(dǎo)教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p><b>　　目錄</b

3、></p><p>　　中文摘要…………………………………………………………………………3</p><p>　　英文摘要…………………………………………………………………………4</p><p>　　1 前言………………………………………………………………………… 6</p><p>　　2 材料和方法………………………………………

4、………………………… 6</p><p>　　2.1 材料………………………………………………………………………7</p><p>　　2.2 方法………………………………………………………………………7</p><p>　　2.2.1 干露實驗及采樣………………………………………………………7</p><p>　　2.2.2 血淋巴

5、細胞觀察和計數(shù)………………………………………………7</p><p>　　2.2.3 血清中酶活力和蛋白測定……………………………………………8</p><p>　　2.2.4 干露實驗中梭子蟹成活率……………………………………………8</p><p>　　2.2.5 數(shù)據(jù)處理………………………………………………………………8</p><p

6、>　　3 實驗結(jié)果…………………………………………………………………… 8</p><p>　　3.1 不同干露時間下三疣梭子蟹活力觀……………………………………8</p><p>　　3.2 不同干露時間對梭子蟹血淋巴的凝固時間的影響……………………9</p><p>　　3.3 干露不同時間對暫養(yǎng)梭子蟹免疫酶活力和血清蛋白影響……………9</

7、p><p>　　3.4 干露對梭子蟹血細胞總數(shù)及大顆粒細胞比例的影響…………………10</p><p>　　3.5 干露實驗梭子蟹最終成活率……………………………………………11</p><p>　　4 討論………………………………………………………………………… 11 </p><p>　　5 結(jié)論…………………………………………………

8、……………………… 13 </p><p>　　6 致謝………………………………………………………………………… 13</p><p>　　參考文獻…………………………………………………………………………14 </p><p>　　不同干露時間對三疣梭子蟹非特異性免疫系統(tǒng)的影響</p><p>　　[摘要] 本實驗研究了干露不同時間對三疣梭

9、子蟹非特異性免疫系統(tǒng)的影響，將三疣梭子蟹離水干露1h、2h后，記干露一小時組為A組，另一組為B組，進行恢復(fù)性暫養(yǎng)，對三疣梭子蟹血細胞總數(shù)、血清蛋白、酸、堿性磷酸酶、超氧化物歧化酶等非特異性免疫系統(tǒng)相關(guān)指標進行跟蹤檢測。結(jié)果表明：正常梭子蟹的血淋巴凝固時間平均血淋巴凝固時間為38s，干露梭子蟹血淋巴凝固時間隨干露時間的延長發(fā)生明顯變化；干露實驗組與對照組血細胞總數(shù)極顯著降低（P<0.01），而大顆粒細胞比例相反則有顯著上升(P＞0.

10、05）； 2h干露組血細胞總數(shù)低于1h干露組，差異極顯著（P <0.01）；經(jīng)過干露恢復(fù)后：1h干露組血細胞總數(shù)雖然較恢復(fù)前數(shù)量有所上升，但是比對照組仍然偏低，差異顯著（P <0.05）；2h干露組血細胞總數(shù)恢復(fù)前無明顯變化，仍然比對照組數(shù)值偏低，差異均極顯著（P <0.01）。大顆粒細胞比例：干露組和對照組之間變化明顯，干露組低于對照組（P <0.01）；大顆粒細胞占血細胞總數(shù)的百分比差異顯著，1h、2h干露組

11、高于對照組（P <0.05）； 但是后續(xù)恢復(fù)暫養(yǎng)期大顆粒細胞比例也無明顯變化；梭子蟹血清蛋白含量與對照組相比</p><p>　　[關(guān)鍵詞] 三疣梭子蟹 干露 血細胞總數(shù) 血清蛋白 酸性磷酸酶 堿性磷酸酶 超氧化物歧化酶</p><p>　　Study on influences of air-exposure on the non-specific

12、immunological parameters of Portunus trituberculatus</p><p>　　[Abstract] This experimental study on influences of air-exposure on the non-specific immunological parameters of Portunus trituberculat

13、us,Make the Portunus trituberculatus air-exposure 1h, 2h, Mark group A and group B,portunus total hemocyte count、serum protein, acid, alkaline phosphatase, superoxide dismutase enzymes non-specific immune system-rel

14、ated indicators for tracking and detection. The results showed that: the hemolymph coagulation time of normal crab is an average of 38s, the hemolymph</p><p>　　[Key words] Portunus trituberculatus a

15、ir-exposure Total hemocyte count </p><p>　　Acid phosphatase Alkaline phosphatase Superoxide Dismutase</p><p>　　不同干露時間對三疣梭子蟹非特異性免疫系統(tǒng)的影響</p><p><b>　　1 前言</b><

16、;/p><p>　　三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）是我國重要的海產(chǎn)經(jīng)濟蟹類之一，山東半島至南海海域均有廣泛分布，是近年來重點海水捕撈品種和海水增養(yǎng)殖的品種[1]。近年來，隨著養(yǎng)殖方式的不斷變更進步，養(yǎng)殖環(huán)節(jié)的不斷優(yōu)化使得該產(chǎn)業(yè)在東部沿海地區(qū)迅猛發(fā)展，現(xiàn)已成為浙江省六大優(yōu)勢養(yǎng)殖品種之一。三疣梭子蟹養(yǎng)殖方式繁多，其中圍塘輪養(yǎng)、淺海蟹籠吊養(yǎng)、海捕蟹暫養(yǎng)育肥、沙池精養(yǎng)、工廠化養(yǎng)殖等多種養(yǎng)殖模式

17、的在東部沿海地區(qū)大力推廣，尤其在浙江省，全省一年創(chuàng)收超過3億元。海捕梭子蟹育肥暫養(yǎng)是梭子蟹養(yǎng)殖生產(chǎn)的重要組成部分，主要是利用9－10月份梭子蟹海區(qū)自然資源數(shù)量與價格優(yōu)勢，收購海捕蟹，經(jīng)過一段時間的沙池暫養(yǎng)與土池育肥后上市，反季節(jié)上市，經(jīng)濟效益十分可觀。</p><p>　　雖然海捕暫養(yǎng)梭子蟹養(yǎng)殖管理相對簡單，但是近年來該產(chǎn)業(yè)連續(xù)出現(xiàn)大面積縮減，主要原因是收購的海捕蟹成活率較低，造成極大的養(yǎng)殖風(fēng)險。據(jù)調(diào)查，上世紀9

18、0年代海捕梭子蟹暫養(yǎng)成活率基本在80%以上，以后隨著漁獲量增加，成活率逐漸下降。近年來平均成活率只有10%～20%左右。根據(jù)筆者調(diào)查，用于暫養(yǎng)的海捕梭子蟹主要收購于我國近海的蟹籠捕撈蟹，梭子蟹捕撈出水后，由于是海上作業(yè)，處理較為粗放。從梭子蟹捕撈出水 — 分級挑揀 ─ 運輸船中轉(zhuǎn) ─ 到達碼頭 ─ 分揀─運輸至?xí)吼B(yǎng)池，經(jīng)歷多次干露、冷水浸洗、物理晃動、溫差驟變等環(huán)境、物理因素的脅迫，不可避免會造成外傷以及內(nèi)部循環(huán)系統(tǒng)損傷[2]。筆者認為

19、多次長時間的干露、物理晃動等可能均會引起三疣梭子蟹體內(nèi)某些生理指標的改變，進而導(dǎo)致后期暫養(yǎng)成活率降低。</p><p>　　已有的研究表明，環(huán)境脅迫[3]，例如水質(zhì)突變、捕撈、干擾等會造成水生生物的應(yīng)激反應(yīng)，短時間的應(yīng)激反應(yīng)可能是一種保護性狀態(tài)，但是長時間的應(yīng)激反應(yīng)，會造成機體的防御功能降低，容易遭受疾病侵襲導(dǎo)致死亡[4]。本實驗將三疣梭子蟹離水干露不同時間后，進行后續(xù)暫養(yǎng)，對其進行跟蹤檢測三疣梭子蟹血細胞總數(shù)、

20、血清蛋白、酸性磷酸酶、堿性磷酸酶、超氧化物歧化酶等非特異性免疫系統(tǒng)相關(guān)指標[5]，以期對離水干露對三疣梭子蟹健康影響進行評估，為海捕暫養(yǎng)蟹收購工藝及健康狀況評價提供參考依據(jù)。</p><p><b>　　2 材料與方法</b></p><p><b>　　2.1材料</b></p><p>　　試驗地點：干露及后續(xù)暫養(yǎng)試

21、驗在浙江省海洋水產(chǎn)研究所西軒試驗場進行，非特異性免疫指標在浙江省海洋水產(chǎn)研究所病害中心實驗室進行。</p><p>　　試驗動物及暫養(yǎng)條件：本實驗用的三疣梭子蟹均用蟹籠捕撈自浙江省海洋水產(chǎn)研究所西軒試驗場的梭子蟹養(yǎng)殖塘，單個體重為（50.0+15.45g），健康狀態(tài)良好頭胸甲長均在4.5cm以上，均為雄性。三疣梭子蟹暫養(yǎng)于直徑約為3米，水深約為0.6m聚乙烯塑料養(yǎng)殖桶內(nèi)，每天投喂新鮮小黃魚、帶魚魚塊，每天換水50

22、%。水溫25-27℃，試驗室內(nèi)溫度29.5～31℃，溶解氧5mg/L以上，pH 8.2左右，鹽度26，暫養(yǎng)一周后開始試驗。</p><p>　　儀器及工具：解剖剪，注射器，剪剖盤，溫度計，濕度計，酒精棉球，血細胞計數(shù)板， 7221型分光光度計，臺式超低溫冷凍離心機。</p><p>　　試劑：75%的酒精；10%的福爾馬林溶液；蛋白檢測試劑盒、酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(AKP)和超

23、氧化物歧化酶(SOD)測試盒均購自南京建成生物工程研究所。 </p><p><b>　　2.2方法</b></p><p>　　2.2．1干露實驗及采樣</p><p>　　預(yù)試驗：預(yù)實驗氣溫30℃，濕度89%，水溫28℃，分別將梭子蟹干露1h、2h、2.5h、3h，每個時間段組梭子蟹7只，每隔10min，以木棒觸碰及肉眼觀察各組梭子蟹活動情

24、況，干露后將各組梭子蟹重新暫養(yǎng)于塑料桶（70cm×50cm×35cm），水深25cm，觀察24h。選擇適宜的干露時間。預(yù)實驗結(jié)果顯示：在此試驗氣溫與濕度下，干露3h將直接導(dǎo)致死亡，而干露2h組則死亡2只，干露1h組死亡1只，干露30min組未死亡。因此確定正式試驗的干露時間為1h和2h。</p><p>　　表1干露不同時間對梭子蟹活力的影響</p><p>　　Tab

25、.1 The influences of air-exposure on the living activities of Portunus trituberculatus</p><p>　　正式試驗分組：試驗設(shè)3組：干露1h和2h兩個實驗組和對照組分別記為A、B、C組。每個大組實驗梭子蟹50只。 </p><p>　　梭子蟹活力觀察：實驗期間不間斷觀察并記錄梭子蟹的活力以及生存狀態(tài)。

26、 </p><p>　　采樣：干露時間到后，每個大組迅速隨機取10只梭子蟹進行采樣，用75%的酒精棉球擦拭梭子蟹游泳足基膜處，用事先吸入0.5mL的10%福爾馬林固定液的一次性注射器準確抽取0.5mL血液，迅速混勻，用于血細胞計數(shù)；另外用一次性注射器盡可能完全抽取梭子蟹血淋巴，置于5ml離心管，常溫放置2小時后，靜置于4℃冰箱過夜，然后以無菌

27、吸管將凝固血淋巴塊與離心管壁剝離，3000r/min冷凍離心，分離血清保存于-70℃超低溫冰箱，用于各項非特異性免疫指標的測定。</p><p>　　血淋巴凝固時間測定：采樣的梭子蟹抽取約0.2mL血液，迅速滴加于潔凈載玻片上，開始計時，同時緩緩將載玻片進行左右傾斜晃動，以血淋巴不再流動為凝固時間。 </p><p>　　干露后恢復(fù)試驗：A、B、C各組取樣完畢后，各組剩余的20只梭子蟹暫養(yǎng)

28、于大養(yǎng)殖桶，進行恢復(fù)試驗。各組進行正常換水和投餌，記錄期間死亡率，持續(xù)暫養(yǎng)3d、6d后再隨機選取存活梭子蟹的一半進行上述采樣程序，采血并記錄血淋巴凝固時間。對照組不進行干露，直接進行采樣進行與實驗組相同的實驗并記錄。</p><p>　　2.2.2血淋巴細胞觀察和計數(shù)</p><p>　　普通血球計數(shù)板（25×16）進行血細胞總數(shù)計數(shù)及大顆粒細胞總數(shù)計數(shù)，為存檔及提高計數(shù)效率，用

29、顯微照相系統(tǒng)將記數(shù)框內(nèi)圖像拍下，然后在電腦上進行計數(shù)，每個樣品計數(shù)3次。血細胞及大顆粒細胞總數(shù)= =N×25/5×10×106×2 (N為五個中方格的血細胞總數(shù))</p><p>　　2.2.3血清中酶活力和蛋白測定</p><p>　　采用南京建成生物工程研究所酶活力測試盒測定AKP、ACP、SOD的活力，其中，AKP以100mL血清在37℃與基質(zhì)

30、作用30分鐘產(chǎn)生1mg酚為1個活力單位；ACP以100ml血清在37℃與基質(zhì)作用30分鐘產(chǎn)生1mg酚為一個金氏單位；SOD以每毫升反應(yīng)液中SOD抑制率達50%時所對應(yīng)的SOD量為一個SOD活力單位（U），用分光光度計測定各測量管的吸光度，具體計算方法參考試劑盒說明進行?？捡R斯亮藍蛋白測定，對干露蟹采集處理好的血清樣本用0.85%的生理鹽水100倍稀釋，測定595nm的吸光度，由于試劑盒方法靈敏度高，為了在一定范圍內(nèi)成線性關(guān)系，血清樣本預(yù)

31、先用生理鹽水稀釋至1.3mg/mL以下。</p><p>　　2.2.4干露實驗中梭子蟹成活率</p><p>　　在環(huán)境溫度為34℃左右，相對濕度達到50%的相對穩(wěn)定的環(huán)境條件下，對海捕暫養(yǎng)三疣梭子蟹進行干露處理，分別以干露1h和2h作為臨界設(shè)定兩個實驗大組，記為C組和D組，此外再設(shè)立一個對照組，對梭子蟹進行干露后持續(xù)死亡率實驗，從而獲得梭子蟹最終成活率。每組30只梭子蟹，C組干露1h；

32、D組干露2h后入水，對照組不進行干露，對干露后的梭子蟹進行持續(xù)養(yǎng)殖6天，正常換水和投喂鮮活餌料，最終統(tǒng)計梭子蟹成活率。</p><p><b>　　2.2.5數(shù)據(jù)處理</b></p><p>　　實驗結(jié)束后，采用10個樣品進行各項指標測定，每個樣品進行2次測試取平均值，對干露實驗死亡率進行累計統(tǒng)計，再通過在實驗類型和實驗組內(nèi)不同條件下對血細胞形態(tài)和密度，各種酶活力及蛋

33、白含量的測定，用統(tǒng)計軟件SPSS11.5和EXCEL軟件處理數(shù)據(jù)，實驗數(shù)值均以平均值+標準差（X±SD）表示。各種酶活力及蛋白濃度的計算參照試劑盒說明進行。</p><p><b>　　3 實驗結(jié)果</b></p><p>　　3.1 不同干露時間下三疣梭子蟹活力觀察</p><p>　　不同干露時間下三疣梭子蟹的活力觀察結(jié)果如下：

34、 </p><p>　　干露后活動反應(yīng)：5min個別開始往體外吐白沫，觸碰時個別行動遲緩；7min 所有蟹都大量吐白沫，大部分蟹觸碰后無反應(yīng)；15min 用手拿起后，足部有活動跡象，大鰲無攻擊性，放下后還能緩慢移動；30min 下顎活動頻率加快，拿起后各個附肢下垂，放下尚能移動；36min 下顎無運動跡象，白沫量亦不斷增多，拿起后放下有運動跡象；45min蟹甲殼顏色變深。1h10min 白沫數(shù)量持續(xù)增多，下顎偶見

35、活動，觸碰無反應(yīng)；1h20min 拿起蟹后亦鰲和附肢無動的跡象，附肢下垂，個別下顎在動；背部顏色越深；1h43min 蟹拿起后放回?zé)o生命跡象，明顯變化是蟹背兩個疣狀突起顏色變深；之后均為明顯活動，觸碰均無反應(yīng)。</p><p>　　干露恢復(fù)：干露1h后放入水中，1h07min第一組蟹活力全部恢復(fù)，下顎均活動，觸碰后反應(yīng)敏捷，能迅速游動，背部顏色變正常；1h30min該組蟹能攝食鮮活飼料；在持續(xù)的觀察過程中，無其它

36、變化。干露2h后放入水中，約30min后所有蟹活力恢復(fù)，觸碰后都能迅速游動，較干露1h的蟹相比，敏捷程度明顯下降；并且無攝食現(xiàn)象；干露2h30min，約需30min可見偶爾有蟹活力恢復(fù)。干露3h，死亡率達到60%，活力恢復(fù)較差。</p><p>　　3.2不同干露時間對梭子蟹血淋巴的凝固時間的影響</p><p>　　記錄不同組內(nèi)每只梭子蟹血淋巴的凝固時間，已死亡的梭子蟹血淋巴凝固時間均超

37、過2min或不凝固的均不予統(tǒng)計，結(jié)果顯示正常梭子蟹的血淋巴凝固時間在1min之內(nèi)，平均血淋巴凝固時間為38s，干露梭子蟹血淋巴凝固時間隨干露時間的延長發(fā)生明顯變化，表2顯示了梭子蟹血淋巴在干露不同時間的凝集性，從中看出，干露時間越長血淋巴凝固時間相對延長；對于干露后存活下來的蟹，正常養(yǎng)殖，血淋巴凝固時間又恢復(fù)到了正常水平。</p><p>　　表2不同取樣時間血淋巴的凝固時間</p><p&g

38、t;　　Tab2. Blood coagulation time of Portunus trituberculatus at different sampling time</p><p>　　3.3干露不同時間對暫養(yǎng)梭子蟹免疫酶活力和血清蛋白影響</p><p>　　梭子蟹干露實驗蛋白含量和各種免疫相關(guān)酶活性的測定結(jié)果及不同時間處理的各項指標的T檢驗如表3和表4。從中看出，相對延長干露

39、時間，血淋巴內(nèi)蛋白含量有顯著變化，干露1h和干露2h與對照組相比，干露1h蛋白含量變化不大，而干露2h后蛋白含量差異顯著（P<0.05）；酸性磷酸酶活性隨干露時間延長略有增強，但總的來看與對照組和其它人為干擾差異不顯著（P＞0.05）；干露1h的堿性磷酸酶活力在及恢復(fù)3天后均與對照組差異明顯，但是干露2h后其堿性磷酸酶活性與對照組未表現(xiàn)出明顯差異；干露操作引起超氧化物歧化酶活力的變化比較明顯，無論是干露和對照比較、恢復(fù)組和對照比較

40、差異均極顯著(P＜0.01)，干露1h和干露2h相比，SOD活力和對照組以及活力恢復(fù)組之間的差異均不顯著（P＞0.05）。</p><p>　　表3 不同干露及恢復(fù)時間對三疣梭子蟹非特異性免疫指標的影響</p><p>　　Tab3. The influences of air-exposure on the non-specific immune responses of Portunu

41、s trituberculatus</p><p>　　表4 血清蛋白和三種酶非特異性指標T檢驗結(jié)果</p><p>　　Tab 4.Result of T test</p><p>　　注：A代表干露1小時組；B代表干露2小時組；C代表對照組，D代表1小時干露恢復(fù)3天；E代表2小時干露恢復(fù)3天，以P＞0.05為差異不顯著；P＜0.05為差異顯著；P＜0.

42、01為差異極顯著。</p><p>　　3.4干露對梭子蟹血細胞總數(shù)及大顆粒細胞比例的影響</p><p>　　血細胞總數(shù)表明：干露實驗組與對照組血細胞總數(shù)極顯著降低（P＜0.01），而大顆粒細胞比例相反則有顯著上升(P＞0.05）； 2h干露組血細胞總數(shù)低于1h干露組，差異極顯著（P＜0.01）；經(jīng)過干露恢復(fù)后：1h干露組血細胞總數(shù)雖然較恢復(fù)前數(shù)量有所上升，但是比對照組仍然偏低，差異顯著

43、（P＜0.05）；2h干露組血細胞總數(shù)恢復(fù)前無明顯變化，仍然比對照組數(shù)值偏低，差異均極顯著（P＜0.01）。大顆粒細胞比例：干露組和對照組之間變化明顯，干露組低于對照組（P＜0.01）；大顆粒細胞占血細胞總數(shù)的百分比差異顯著，1h、2h干露組高于對照組（P＜0.05）； 但是后續(xù)恢復(fù)暫養(yǎng)期大顆粒細胞比例也無明顯變化。具體結(jié)果見表5和表6。</p><p>　　表5 干露不同時間對三疣梭子蟹血細胞數(shù)量和大顆粒細胞比

44、例的影響</p><p>　　Tab 5. The influences of air-exposure on total hemocyte count，proportion of large granular cell of Portunus trituberculatus</p><p>　　表6 血淋巴細胞指標T檢驗結(jié)果</p><p>　　Tab

45、6.Result of T test</p><p>　　注：A代表干露1小時組；B代表干露2小時組；C代表對照組;D代表1小時干露恢復(fù)3天；E代表2小時干露恢復(fù)3天，以P＞0.05為差異不顯著；P＜0.05為差異顯著；P≤0.01為差異極顯著。</p><p>　　3.5干露實驗梭子蟹最終成活率</p><p>　　干露（干露溫度30℃，濕度90%）結(jié)束后正常養(yǎng)殖

46、，結(jié)果顯示，三疣梭子蟹經(jīng)干露1小時和2小時后最終死亡率分別達到了30%，和70%。</p><p><b>　　4 討論</b></p><p>　　近年來的海捕梭子蟹暫養(yǎng)成活率較低，嚴重制約了該產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，其原因可能與海捕梭子蟹經(jīng)長期擠壓脅迫、干露、冷水刺激等物理刺激，導(dǎo)致出現(xiàn)較嚴重的應(yīng)激反應(yīng)，從而自身健康狀況與疾病抵抗力下降有關(guān)。養(yǎng)殖生物的死亡是養(yǎng)殖生物與暫養(yǎng)管理

47、、養(yǎng)殖環(huán)境、病原微生物綜合作用的結(jié)果，其中養(yǎng)殖生物自身健康狀況與疾病抵抗力是養(yǎng)殖成功與否的重要的因素之一，而評估養(yǎng)殖生物的健康狀況最直接的手段就是通過某些生理生化指標以及其表觀活力特征。本研究對三疣梭子蟹干露不同時間后，其活力表現(xiàn)特點、血細胞總數(shù)、大顆粒細胞比例、血清蛋白[6]、酸堿性磷酸酶[7]、超氧化物歧化酶[8]等非特異性免疫指標[9]進行較為系統(tǒng)的研究，對干露脅迫對三疣梭子蟹健康狀況及非特異性免疫系統(tǒng)的影響進行評估，為三疣梭子蟹

48、健康評估及收購工藝改良提供參考。</p><p>　　蟹類生物中中華絨螯蟹、鋸緣青蟹均能適應(yīng)長期的干露運輸，在適宜溫濕度下，可在空氣中暴露1周而不死亡[10]，而三疣梭子蟹則不能長期干露運輸，在適宜溫度下最長存活時間也比上述兩種蟹類較短。因此干露一定時間勢必會對三疣梭子蟹的健康狀況產(chǎn)生較大影響。限于試驗條件，本試驗干露的溫度較高，為了保證梭子蟹的存活，干露時間較短，但是試驗結(jié)果仍然表現(xiàn)出較明顯的干露的時間效應(yīng)。從

49、干露不同時間對三疣梭子蟹的表觀活力影響來看，離水僅5min，梭子蟹已經(jīng)出現(xiàn)保護性的對外界反應(yīng)不靈敏狀態(tài)，口吐白色泡沫以保持呼吸的空氣濕潤，而干露至1h43min，梭子蟹已經(jīng)呈現(xiàn)假死狀態(tài)，對外界刺激無任何反應(yīng)，呼吸似乎也停止，但是放入水中后經(jīng)過約30min即可恢復(fù)運動，但是活力較低。證實在干露情況下，梭子蟹很快進入保護性的新陳代謝降低的狀態(tài)，這有利于其生命力的延長。干露時間3小時，對梭子蟹的健康狀況影響較大，恢復(fù)活力的時間也較長。<

50、/p><p>　　血細胞總數(shù)雖然易受環(huán)境因素及蛻殼等生理因素影響，但是可以直接反應(yīng)甲殼動物的健康狀況。甲殼類動物在感染各種致病原或環(huán)境壓力下，THCs作為體細胞防御屏障會出現(xiàn)脫顆粒、吞噬、包裹等一系列免疫防御反應(yīng)，從而導(dǎo)致THCs下降[11] 。例如羅氏沼蝦在注射低濃度的氣單胞菌(Aeromonas veronii)后在4h到24h內(nèi)THCs就出現(xiàn)顯著性降低[12]，而日本囊對蝦在感染鐮刀菌后血細胞數(shù)僅有對照組的54

51、.3%[13]；受寄生蟲侵襲后血細胞也會顯著降低，蘭蟹（Callinectes sapidus）感染血卵渦鞭蟲（Hematodinium perezi）后THCs會下降50-70%[14]，而嚴重感染血卵渦鞭蟲（Hematodinium.sp）后，三疣梭子蟹血淋巴中甚至觀察不到血細胞的存在[15]。本實驗結(jié)果也證實，經(jīng)過僅1h、2h的干露后，即使放入水體中進行暫養(yǎng)恢復(fù)3d，三疣梭子蟹的血細胞總數(shù)均比對照組要顯著降低，說明干露對梭子蟹的血

52、淋巴系統(tǒng)造成較為顯著的影響，而這種影響經(jīng)過短時間尚不能完全恢復(fù)。大顆粒細胞被認為是甲殼類血細胞中較為重要的防御體系之一，受致病原刺激后，大顆粒細胞的比例會有明</p><p>　　血清蛋白含量也可以反映甲殼動物的健康狀況，報導(dǎo)證實中國明對蝦感染W(wǎng)SSV后會造成血清蛋白含量增加[16]，但是中國明對蝦（Fenneropenaeus chinensis）和凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei）感染病毒

53、后血清蛋白含量顯著降低的報導(dǎo)[17] [18],本試驗中梭子蟹血清蛋白在干露1h后與對照組無顯著差異，但是干露2h后數(shù)值上升，與對照組差異顯著，但是在恢復(fù)3天后，蛋白含量恢復(fù)至對照組水平。</p><p>　　酸性磷酸酶（ACP）、堿性磷酸酶（AKP）屬于磷酸單酯水解酶類，由于兩種酶的催化反應(yīng)最適pH值不同而有所區(qū)分。其中ACP是吞噬溶酶體的重要組成部分之一，會伴隨著血細胞的防御性吞噬、包裹反應(yīng)而釋放，在生物體內(nèi)

54、參加磷酸基團的轉(zhuǎn)移代謝,而AKP也是溶酶體的重要組成之一，但是還直接參與磷的代謝，對甲殼類鈣質(zhì)吸收、外骨骼形成等具有重要調(diào)節(jié)作用。本試驗中，干露不同時間的三疣梭子蟹酸性磷酸酶雖然在數(shù)值上略有變動但是與對照組相比無顯著差異，而堿性磷酸酶在干露1h后與對照組差異顯著，而干露2h后無顯著差異，這種數(shù)值上的變化的不規(guī)律性，尚有待進一步研究。</p><p>　　生物在受到環(huán)境脅迫、病原微生物侵襲時均會產(chǎn)生大量活性氧，而超

55、氧化物歧化酶（SOD）是一類重要的清除活性氧的抗氧化酶，因此研究人員生物體內(nèi)SOD活性的與其免疫水平密切相關(guān)，可作為生物非特異性免疫系統(tǒng)指示性指標[19][20]。本實驗結(jié)果證實，干露組三疣梭子蟹血淋巴SOD活性具有極顯著降低，但是經(jīng)過3天恢復(fù)其數(shù)值又極顯著增加。提示可將SOD作為三疣梭子蟹健康狀況的指標性參數(shù)。這說明梭子蟹在離水運輸過程中其體內(nèi)SOD降低，但是經(jīng)過后期的恢復(fù)養(yǎng)殖，其SOD值又會上升，甚至超過正常水平。SOD活性經(jīng)過后期

56、長期養(yǎng)殖是否會恢復(fù)至對照組水平，有待下一步研究。</p><p>　　綜上，干露不同時間對三疣梭子蟹不同非特異性免疫指標有或多或少的影響，其中以血細胞數(shù)量、血液凝固時間、超氧化物歧化酶活性波動最大，說明可將這兩個指標作為三疣梭子蟹受環(huán)境及物理性脅迫時的特征性指標，可用于梭子蟹健康狀況評價的特征性指標。</p><p><b>　　5結(jié)論</b></p>

57、<p>　　三疣梭子蟹血細胞總數(shù)、血液凝固時間、超氧化物歧化酶活性可作為其健康狀況評價指標，亦推薦用于環(huán)境、物理脅迫、微生物感染、免疫增強劑篩選的特征性指標。</p><p><b>　　[參 考 文 獻]</b></p><p>　　[1]王紅勇，王海波，賴秋明，等.遠海梭子蟹人工育苗試驗 [J].海洋水產(chǎn)研究，2004，25（3）：78-80.

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