TMV抗性基因N介導(dǎo)的煙草過敏性反應(yīng)及同源基因克隆.pdf

1、分類號密級單位代碼：!Q3鰉學(xué)號：S1QQ21QQ24籃名微雇業(yè)大學(xué)學(xué)位論文TMV抗性基因Ⅳ介導(dǎo)的煙草過敏性反應(yīng)及同源基因克隆StudiesonhypersensitiveresponsemediatedbyTMVresistancegeneNandcloningofhomologousgenein研究指導(dǎo)Nicotianatabacum教生：謝鴟師：直俊出副麴援申請學(xué)位類別：堡堂亟專業(yè)領(lǐng)域名稱：遺佳堂研所究在方學(xué)向：擅物生堡生絲墨僉王

2、篁塑堂院：生金型堂堂瞳答辯委員會主席：泵強已眾強巴2。，年～一月叭89iii)l，L2舊幔㈣及■■■I一一WiiiV摘要ILUIHIILLIIILILLHIIIIILIIIlUIY2442798煙草是～種重要的經(jīng)濟作物。煙草花葉病毒(Tobaccomosaicvirus，TMV)侵染引起的煙草花葉病在我國發(fā)生極為普遍，嚴(yán)重影響了煙草的產(chǎn)量和質(zhì)量。有效防治TMV的方法是培育抗病品種。因此，探究抗性基因Ⅳ與TMV的相互作用誘導(dǎo)過敏性反應(yīng)(H

3、ypersensitiveresponse，HR)的影響因素，以及對其中的抗性基因進行克隆和功能鑒定具有重要意義。本實驗以煙草品種NicotianatabacumCVXanthi為材料，研究其在TMV感染下HR誘導(dǎo)的時間性和溫度敏感性，以及不同濃度TMV接種對HR誘導(dǎo)和枯斑形成的影響，同時克隆TMV抗性基因Ⅳ的同源基因，并對其主要功能區(qū)域進行分析。從而為進一步理解植物的抗病機理和煙草抗病毒品種的選育提供理論依據(jù)。主要研究成果如下：1通過

4、觀察TMV感染含Ⅳ基因煙草(ⅣtabacumCVXanthiNN)與不含Ⅳ基因煙草(ⅣtabacumCVXanthinn)的癥狀表現(xiàn)，結(jié)果顯示，不含Ⅳ基因的煙草Xanthinn在TMV感染后葉片側(cè)脈及支脈組織呈半透明狀，葉片薄厚不勻，呈花葉癥狀。含Ⅳ基因的煙草XanthiNN在TMV感染后出現(xiàn)明顯的HR，形成枯斑，獲得抗性。2通過對TMV感染后HR的出現(xiàn)進行了監(jiān)測。結(jié)果表明，TMV接種后36h在感染部位開始出現(xiàn)HR，48hHR癥狀明顯，

5、隨著時間的推移，斑點內(nèi)的細胞逐漸死亡，形成枯斑。TMV接種一段時間后，在22。C或28。C時，煙草葉片出現(xiàn)典型的HR，而在15。C或356C時，葉片上不出現(xiàn)HR。這些結(jié)果說明HR的誘導(dǎo)具有時問性和溫度敏感性。3不同濃度TMV感染對HR的誘導(dǎo)進行了調(diào)查，結(jié)果顯示，用不同濃度TMV提取液接種，無論TMV提取液濃度的大小，在22。C時，都是在接種36h后出現(xiàn)HR。而在28。C時，都是在接種48h后出現(xiàn)HR。這與前面的結(jié)果一致，說明TMV濃度對

6、HR的誘導(dǎo)影響不明顯。4不同濃度TMV感染對枯斑形成的大小及密度進行了研究，結(jié)果顯示，用不同濃度TMV提取液接種，無論在22。C或28。C下，都對枯斑的大小有一定的影響，高濃度導(dǎo)致枯斑增大，低濃度下枯斑大小變化不大，而且枯斑密度也與濃度呈一定的相關(guān)性。5根據(jù)已知的煙草Ⅳ基因設(shè)計特異性引物，通過RTPCR獲得Ⅳ基因同源基因的cDNA片段(命名為NHl)。序列分析顯示ⅣH，cDNA含2040bp核苷酸，編碼679個氨基酸。序列同源性比較發(fā)現(xiàn)