對幾種病原菌拮抗木霉的篩選和菌種改良.pdf

1、本實驗從四川省內(nèi)13個不同的縣市作物根系土壤中分離獲得393株木霉(Trichoderma spp.)菌株。其中哈茨木霉168株，康氏木霉44株；擬康氏木霉40株，黃綠木霉34株，綠色木霉8株，桔綠木霉3株，鉤狀木霉1株。用這393株木霉菌株進行對峙培養(yǎng)，所有的木霉菌株對病原菌在一定程度上都有的抑制作用，但是僅有1.5％的木霉菌株對黃瓜枯萎病病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum)抑菌率大于80％，

2、1.27％的木霉菌株對辣椒疫霉(Phytophthora capsicf)的抑菌率大于70％，初篩選出對黃瓜枯萎菌和辣椒疫霉拮抗作用較強的木霉菌株13株，其中T55對黃瓜枯萎菌抑菌率為80.16％，T25對辣椒疫霉的抑菌作用最高達80.77％。 初篩選出來的13株菌株抗生作用測定表明，難揮發(fā)性代謝產(chǎn)物對病原菌的抑菌作用明顯的高于揮發(fā)性代謝物的抑菌作用，T55和T315的難揮發(fā)性代謝產(chǎn)物對黃瓜枯萎菌的抑菌作用大于60％，對辣椒疫霉

3、的抑菌率大于50％，其中’F55對兩種病原菌的抑菌率最高，分別是75.53％和54.26％。 木霉生長速度和產(chǎn)孢量的測定發(fā)現(xiàn)，木霉菌株能迅速的生長，其中T237生長速度最快，但是T25的產(chǎn)孢量最大，T55的產(chǎn)孢量最小，但是對抗逆性的測定發(fā)現(xiàn)T55在5℃、10℃、35℃，pH=4、9、10的條件下都能生長良好。 本實驗對木霉菌株的篩選旨在篩選出優(yōu)良的菌株再進行改良，為了得到更好的改良菌株，擴大菌株的抑菌譜，而且原生質(zhì)體融合

4、采用菌株形態(tài)特征標(biāo)記，T55菌落背部顯黃褐色，綜合以上特性，選用T55和T25作為親本進行融合實驗。 通過不同菌齡、酶液、緩沖液-穩(wěn)定劑系統(tǒng)，酶解時間，再生培養(yǎng)基組合等條件對木霉T25、T55原生質(zhì)體制備和再生的影響研究，結(jié)果表明，木霉T25、T55原生質(zhì)體制備和再生的最適條件為：崩潰酶13mg/mL，0.2mg/mL磷酸緩沖液(PBS)，pH值5.8和0.6mol/L NaCl組成的緩沖液穩(wěn)定系統(tǒng)，木霉T25菌齡為20h，木霉

5、T55菌齡為26h的菌絲體在30℃下，酶解3h，最后T25、T55獲得原生質(zhì)體數(shù)量分別為為9.0x10<'6>個/mL、6.33×10<'6>個/mL，兩菌的再生培養(yǎng)基都是以加入40.5％酵母膏和0.5％泛酸鈣的改良Czapek與NaCl的組合培養(yǎng)基，再生率分別為1.150％和0.785％。 通過滅活條件的研究，確定T55的滅活溫度在50～55℃之間。制備T25和T55原生質(zhì)體，將T55滅活處理，在PEG促融劑的作用下融合，得到

6、58株融合子。 對58株融合子進行對峙培養(yǎng)、抗生作用的測定，產(chǎn)孢量的測定，以篩選出產(chǎn)孢量大，抗逆性強，抑菌譜寬，抑菌作用強的融合子菌株，篩選得到n1，f15，f43，f41，f39，f37，f42和f24等8株融合子菌株較好，作為篩選的目標(biāo)菌株，進一步的研究，f11，f15比親本菌株擴大了抑菌譜，對黃瓜枯萎病菌，辣椒疫霉和番茄灰霉都有抑菌作用。f11對3種病原菌的抑菌率比T55分別提高了4.97％、3.20％和2.71％，fl1