LPIN1基因多態(tài)性與奶牛脂肪肝的相關(guān)性分析.pdf

1、脂肪肝是指肝細(xì)胞內(nèi)脂肪堆積過多引起的肝臟疾病，奶牛脂肪肝通常發(fā)生于代謝狀態(tài)和生理狀態(tài)嚴(yán)重變化的圍產(chǎn)期。圍產(chǎn)期奶牛攝入干物質(zhì)量減少引起生糖先質(zhì)不足、糖異生障礙，造成的奶牛圍產(chǎn)期能量負(fù)平衡，是奶牛脂肪肝的病理學(xué)基礎(chǔ)。圍產(chǎn)期奶牛能量負(fù)平衡則必然引起脂肪的動員。脂肪動員所分解的脂肪一方面用于彌補(bǔ)糖異生障礙所引起的能量虧欠;另一方面將大量的FFA（游離脂肪酸）釋放入血液，血液中的大量FFA被肝臟吸收并沉積而引發(fā)脂肪肝。影響奶牛脂肪肝發(fā)生發(fā)展的因素

2、主要有三個:營養(yǎng)因素，飼養(yǎng)管理因素和遺傳性因素。遺傳因素主要包括影響采食量的基因、影響脂肪組織中脂類代謝的基因和影響肝臟中脂類合成及分泌的基因。當(dāng)這些基因發(fā)生突變時可能會影響脂肪細(xì)胞因子的合成及脂質(zhì)的代謝，特別是參與肝臟脂質(zhì)形成、脂肪組織脂解以及肝臟脂肪β氧化、脂質(zhì)包裝和分泌的基因發(fā)生突變時可能會增加脂肪肝的發(fā)病機(jī)率。
　　經(jīng)生物化學(xué)和遺傳學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，LPIN1（脂素1）基因?qū)χ窘M織甘油三酯（Triacylglycerol，TA

3、G）的合成、儲存與脂解作用具有調(diào)節(jié)作用，LPIN1基因出現(xiàn)缺失、增減或者替換時能夠引起嚴(yán)重的脂肪和能量代謝障礙。本實(shí)驗(yàn)通過對LPIN1基因全部的19個外顯子進(jìn)行PCR增和測序，以及通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)對奶牛血清中LIPIN1含量進(jìn)行檢測，對LPIN1基因突變與奶牛脂肪肝發(fā)生的關(guān)聯(lián)性進(jìn)行探究，尋找與奶牛脂肪肝發(fā)病相關(guān)的基因位點(diǎn)，為輔助選種、育種和優(yōu)良品種奶牛的培育提供科學(xué)依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)獲得以下結(jié)果:
　　1、對脂肪肝陽性奶牛和脂肪肝陰

4、性奶牛血清中LIPIN1蛋白的含量測定發(fā)現(xiàn)，患脂肪肝奶牛的脂素蛋白總體含量要高于脂肪肝陰性奶牛，奶牛脂肪肝與LIPIN1具有中度相關(guān)性(0.05＜P=0.077＜0.25)。
　　2、對LPIN119個外顯子及其部分側(cè)翼經(jīng)過PCR擴(kuò)增和測序發(fā)現(xiàn)6個SNP（單核苷酸多態(tài)性）位點(diǎn):(NC_007309.4:g.34643T→C、g.38391C→T、g.46128C→T、g.51099T→C、g.65917 C→T、g.65969 G

5、→A)①g.34643 T→C發(fā)生第3外顯子，脂肪肝陽性奶牛與陰性奶牛均完全含有突變基因C;②g.38391C→T出現(xiàn)在第4外顯子，脂肪肝陽性奶牛含有突變基因T的為5/10，脂肪肝陰性奶牛含有突變基因T的為5/10;③g.46128 C→T突變出現(xiàn)在第6外顯子，脂肪肝陽性奶牛含有突變基因T的為5/10，脂肪肝陰性奶牛含有突變基因T的為4/10;④g.51099 T→C出現(xiàn)在第9外顯子，脂肪肝陽性奶牛含有突變基因C的為6/10，脂肪肝陰性

6、奶牛含有突變基因C的為5/10;⑤g.65917C→T出現(xiàn)在第15外顯子，脂肪肝陽性奶牛含有突變基因C的為5/10，脂肪肝陰性奶牛含有突變基因的為7/10;⑥g.65969G→A出現(xiàn)在第15外顯子，脂肪肝陽性奶牛含有突變基因G的為8/10，脂肪肝陰性奶牛含有突變基因的為7/10。第12外顯子未能完成測序工作;其他13個外顯子均未發(fā)現(xiàn)突變位點(diǎn)。以上測序結(jié)果可見，脂肪肝陽性奶牛與脂肪肝陰性奶牛在6個位點(diǎn)的突變率均較高，且突變率相似、無顯著差