水產(chǎn)品中亞甲基藍(lán)及其代謝物多殘留檢測(cè)方法的研究.pdf

1、亞甲基藍(lán)屬噻嗪類(lèi)染料，在獸醫(yī)中主要用作消毒劑與解毒劑。由于其對(duì)防治淡水魚(yú)的水霉病、紅嘴病、小瓜蟲(chóng)病等都有很好的療效，自從孔雀石綠、結(jié)晶紫等三苯甲烷類(lèi)染料被禁用于水產(chǎn)養(yǎng)殖后，亞甲基監(jiān)成了一種較好的替代品。由于研究發(fā)現(xiàn)這種染料及代謝物有致畸作用，且在日本與美國(guó)，并未允許用于水產(chǎn)養(yǎng)殖，其在水產(chǎn)品中的殘留受到廣泛重視。目前有關(guān)亞甲基藍(lán)檢測(cè)方法包括分光光度法、液相色譜法及毛細(xì)管電泳等，主要針對(duì)亞甲基藍(lán)原藥，同時(shí)檢測(cè)水產(chǎn)品中亞甲基藍(lán)及其代謝物天青A

2、，天青B，天青C殘留的文獻(xiàn)未見(jiàn)報(bào)道。因此，有必要對(duì)水產(chǎn)品中亞甲基藍(lán)及代謝物的檢測(cè)進(jìn)行研究。 本文對(duì)高效液相色譜法和超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定水產(chǎn)品中亞甲基藍(lán)及其代謝物進(jìn)行了研究和比較。高效液相色譜法的檢出限為2.0μg/kg。但其不能夠定性被測(cè)物質(zhì)，往往會(huì)因?yàn)殛?yáng)性物質(zhì)的誤認(rèn)導(dǎo)致定量測(cè)定存在誤差。液質(zhì)聯(lián)用法的檢出限是1.0μg/kg。其質(zhì)譜檢測(cè)器的靈敏度相比較高效液相的檢測(cè)器的高，可以大大的提高檢測(cè)的穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性、重現(xiàn)性、檢

3、出限。 首先，比較了不同的還原劑以及酸堿對(duì)亞甲基籃穩(wěn)定性的影響，發(fā)現(xiàn)無(wú)色亞甲基藍(lán)常溫下就比較容易被氧化為亞甲基藍(lán)，亞甲基藍(lán)在酸性條件下相對(duì)穩(wěn)定。同時(shí)，還比較了不同的溫度條件、不同的加熱時(shí)間等對(duì)人工投藥白鯽魚(yú)及小白鼠樣品中亞甲基監(jiān)及其代謝物穩(wěn)定性的影響，發(fā)現(xiàn)樣品中先加入5mL對(duì)甲苯磺酸-乙酸銨緩沖溶液(PH3.0)70℃恒溫水浴加熱15min，再按原方法進(jìn)行處理可以明顯提高亞甲基藍(lán)的回收率。 其次，對(duì)高效液相色譜儀的檢測(cè)波

4、長(zhǎng)、色譜柱、流動(dòng)相等儀器條件，以及液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀的色譜柱、柱溫、流動(dòng)相、梯度洗脫條件、質(zhì)譜參數(shù)等儀器條件進(jìn)行了優(yōu)化，使儀器達(dá)到最佳狀態(tài)。 在優(yōu)化樣品前處理?xiàng)l件方面，通過(guò)比較不同提取劑和不同提取方法等的提取效果，確定了乙腈-對(duì)甲苯磺酸-乙酸銨緩沖溶液為提取溶液，樣品勻漿3min后，在溫度70℃超聲15 min的提取方法，提取液經(jīng)正己烷除脂，二氯甲烷反提取，Supelco DSC-MCAX固相萃取小柱提純與凈化，優(yōu)化了洗脫液，討

5、論了有無(wú)過(guò)膜的影響；在高效液相色譜法分別對(duì)空白活鰻、黃魚(yú)、蝦樣品進(jìn)行了0.005、0.020和0.50mg/kg3個(gè)水平加標(biāo)回收試驗(yàn)，方法回收率在75.9％～93.2％之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.33％～11.86％，方法檢出限為2.0μg/kg，符合組織樣品處理的真實(shí)度和精密度；對(duì)于液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用方法分別對(duì)空白活鰻、烤鰻、黃魚(yú)、蝦樣品在1.0、2.0、4.0、10.0μg/kg4個(gè)不同濃度水平上分別進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，方法回收率為75.5