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1、東北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文豬流行性腹瀉病毒地方株LJB03株分離鑒定姓名:張桂紅申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師:李一經(jīng)20080620AbstractIsolationandIdentificationofTheLocalStrainofPorcineEpidemicDiarrheaVirusLJB/03AbstractAporcineepidemicdiarrheavirus(PEDV)designatedL舊/03WaSi
2、solatedfromthefecesofdia=heaedpigletsandculturedinVerocellpropagatedinmaintenancemedium(MM)containing31xg/mltrypsinTheisolatedvirusWaSidentifiedbystablecytopathiceffects(CPE),TCIDso,RTPCRimmunofluorescenee,ELISAeel:Theex
3、perimentalresultsindicatedthattheblandpaSsagesof20genrationswereundertakenuntilltheCPEcouldbeseenon21genrationsin48handwereharvestedm7211CPEwasshortenandintensifiedwithincreasedpassagesOnpassage40inVetoeellcultureCPEchar
4、acterizedbycellularswellingrefractedreinforcementandparticulatematterincreaserWasdetectedmicroscopicallyafter24h;AgreatquantityofcellsdefluxioedandtheairspaceamangcellsWaSenlargedafter36h;thecellshavingdefluxioedreached8
5、0%andVerocellsreticulatedafter48hButthecellcontrolstillretainedapyknomonolayerandtherewasasmallquantityofcellshavingdefluxioedAtpassagelevelsl,lO,20,30,and40,PEDVswereidentifiedthroughRT—PCRforevery10passageontheMgeneino
6、rdertocertificatedthattheCPEcausedbyPEDVandtheviruspropagatedinVerocellsTheresultswcrcmasculineIndirectimmunofluorescencetestindicatedthatviralantigencouldbedetectedandcouldbeseengreenfluorescenceinVerocellsNogreenfluore
7、sceneecouldbeseenwiththenegativecontrolofmockinfectedVerocellIndirectELISAdetectedthatP/NWas76ItWaSiratifiedthatthevirusinVereeellculturewasmasculineTiterofthevirusWaS10“1CID50/01Ⅱllat40paSsageAboveexperimentscertifiedth
8、atitWaSPEDVfromthefecesanditpropagatedinVerocellcultureinmediumcontainingtrypsinKeyWOrds:porcineepidemicdiarrheavirus;isolation;identificationCandidate:ZhangGuihongSpeciality:PreventiveVeterinaryMedicineSupervisor:ProfLi
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