利用中高度重復(fù)序列和分子標(biāo)記對(duì)栽培稻與幾個(gè)野生稻基因組的比較分析.pdf

1、1.為了探究稻屬B，C，G基因組之間的關(guān)系以及研究中高度重復(fù)序列在稻屬不同物種基因組進(jìn)化中的作用，本研究利用藥用野生稻（O. Officinalis.CC）和斑點(diǎn)野生稻（O.punctata BB）的C0t-1 DNA和總基因組作為探針，對(duì)疣粒野生稻（O.meyeriana Baill GG）進(jìn)行熒光原位雜交分析（Fluorescence in situ hybridization）。兩種野生稻的總基因組和C0t-1 DNA在疣粒野生稻

2、染色體上信號(hào)覆蓋率分別為72.39±0.11，75.60±.18和47.93±0.16，55.47±0.12.此外，以C0t-1 DNA的雜交信號(hào)組成為依據(jù)，對(duì)疣粒野生稻染色體組進(jìn)行了核型分析.結(jié)果表明，G基因組和B，C基因組之間的有一定的親緣關(guān)系，C與G的親緣關(guān)系較近. 從2種野生稻總基因組和C0t-1 DNA在疣粒野生稻染色體上信號(hào)覆蓋率來看，中度和高度重復(fù)序列和功能基因一樣，在不同種中也存在著高度同源性和保守性，并在進(jìn)化過程中得以

3、保存下來。疣粒野生稻基因組增大的重要原因之一，可能是基因組中度和高度重復(fù)序列加倍的結(jié)果。 2.基于比較分子標(biāo)記遺傳圖，用分布在栽培稻和藥用野生稻第1，2，4，6，7，8，10，12染色體上的緊密連鎖的RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism)標(biāo)記為探針，對(duì)藥用生稻有絲分裂染色體進(jìn)行原位雜交，凡檢出相應(yīng)探針信號(hào)的藥用野生稻染色體即認(rèn)定為第1，2，4，6，7，8，10，12染色體，并

4、建立了相應(yīng)的形態(tài)識(shí)別標(biāo)記。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與常規(guī)藥用野生稻的核型分析不同，這些染色體分別對(duì)應(yīng)藥用野生稻常規(guī)核型第6，11，1，2，7，3，12，5染色體，并不遵循染色體長(zhǎng)度隨染色體編號(hào)遞減的順序，比較核型分析與常規(guī)核型中染色體的編號(hào)存在著很大的的差異。通過進(jìn)一步比較分析C0t-1 DNA-FISH定位及帶型，發(fā)現(xiàn)重復(fù)序列在不同種的同源性染色體上的分布存在差異。比較染色體核型與C0t-1 DNA-FISH分析結(jié)果說明，不同種的同源性染色體的確定

5、，有助于種間基因組的直接比較，更直觀反映進(jìn)化中染色體變化的特點(diǎn)以及發(fā)生的遺傳學(xué)事件。 3. 利用定位在栽培稻第1染色體長(zhǎng)臂上的BAC（bacterial artifical chromosome）克隆分子標(biāo)記1L作為探針對(duì)藥用野生稻做FISH分析。通過對(duì)藥用野生稻染色體進(jìn)行常規(guī)核型分析確定藥用野生稻與栽培稻同源的第1 染色體位于常規(guī)核型分析圖的第6號(hào)位置，這與RFLP-FISH的結(jié)果相一致，本研究對(duì)利用BAC-FISH構(gòu)建植物比

6、較遺傳圖進(jìn)行了探索，從結(jié)果來看，BAC－FISH信號(hào)檢出率更高，具有更好的可行性。 4. 利用栽培稻1號(hào)染色體的RFLP標(biāo)記C112，通過切口平移的方法標(biāo)記探針，然后對(duì)斑點(diǎn)野生稻有絲分裂中期染色體進(jìn)行熒光原位雜交（FISH）。然后將斑點(diǎn)野生稻的染色體按照傳統(tǒng)核型分析的方法進(jìn)行配對(duì)。從核型結(jié)果顯示，栽培稻1號(hào)染色體的RFLP探針在斑點(diǎn)野生稻的常規(guī)核型分析圖的第9號(hào)染色體的長(zhǎng)臂上檢測(cè)出雜交信號(hào)，相對(duì)長(zhǎng)度和臂比分別為6.66±0.11