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1、Orexin是一種通過其受體(OX1R和OX2R)發(fā)揮功能的神經(jīng)肽,被分為Orexin A和Orexin B兩種。研究發(fā)現(xiàn)Orexin的分布非常廣泛,參與調(diào)節(jié)多種生理功能,如對(duì)內(nèi)分泌、生殖活動(dòng)的調(diào)控和調(diào)節(jié)攝食與能量平衡、以及對(duì)藥物成癮的影響等。
為了探索不同濃度Orexin A在不同時(shí)間對(duì)綿羊卵巢黃素化顆粒細(xì)胞中StAR、CYP11和3β-HSD(黃體功能相關(guān)基因)的影響,本實(shí)驗(yàn)首先對(duì)綿羊卵巢顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng)使其轉(zhuǎn)變成黃素化顆
2、粒細(xì)胞,即對(duì)顆粒細(xì)胞添加LH(2.5IU/ml)、FSH(2.5IU/ml)、E2(1μg/ mL)后培養(yǎng)24h。而后再對(duì)該黃素化顆粒細(xì)胞添加不同劑量(0.05,0.2,0.5和1μg/mL) Orexin A,分別于刺激后0、2、6、12 h和24h提取細(xì)胞總RNA,運(yùn)用qPCR方法檢測(cè)了Bax/Bcl-2、OX1R以及黃體化相關(guān)基因CYP11、3β-HSD、StAR mRNA表達(dá)量的變化。結(jié)果顯示,添加Orexin A后,與對(duì)照組相
3、比,Bax/Bcl-2的值顯著升高,說(shuō)明Orexin A可以促進(jìn)黃素化顆粒細(xì)胞凋亡;與對(duì)照組相比,2h時(shí)1μg/ml Orexin A和12h時(shí)0.2μ g/ml濃度組均上調(diào)OX1R mRNA的表達(dá);另外與對(duì)照組相比,1μg/ml濃度組在2h時(shí)StAR、CYP11和3β-HSD mRNA表達(dá)量都顯著下降,且0.2μg/ml濃度組在12h時(shí)StAR和3β-HSD mRNA表達(dá)量顯著下降,CYP11無(wú)顯著性變化。這說(shuō)明1μg/ml和0.2μ
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