嗜水氣單胞菌不同分離株外膜蛋白圖譜分析及其與耐藥性的關系.pdf

1、嗜水氣單胞菌（Aeromonashydrophila，Ah）普遍存在于淡水、土壤、人畜糞便等各種環(huán)境中，可引起多種水產(chǎn)動物的敗血癥以及畜禽和人類腹瀉。嗜水氣單胞菌是重要的水生病原菌，給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成極大的經(jīng)濟損失，由于抗生素在漁業(yè)方面的濫用，導致嗜水氣單胞菌產(chǎn)生耐藥性，對水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的進一步發(fā)展產(chǎn)生影響。外膜蛋白作為革蘭氏陰性菌外膜的重要結構對細菌耐藥性的形成有一定的影響。
　　 對43株嗜水氣單胞菌的外膜蛋白（OMP）進行SDS

2、-PAGE分析，根據(jù)不同菌株蛋白質電泳條帶之間的差異性可以將其分成多個型：OMPI～OMPⅥ。使用統(tǒng)計軟件SPSS13.0進行聚類分析，以期在流行病學調(diào)查方面提供進一步了解.采用微量雙倍稀釋法測定43株嗜水氣單胞菌最小抑菌濃度。藥敏試驗結果參照美國NCCLS標準判定各菌株是否耐藥。在所選的7種抗生素中，環(huán)丙沙星、恩諾沙星、氟苯尼考對臨床分離的43株嗜水氣單胞菌的作用較好，抑菌率分別達97.67％（42/43）、97.67％（42/43）

3、和95.35％（41/43），而其它幾種抗生素的抑菌效果較差，紅霉素、泰樂菌素，抑菌率只有9.30％（4/43）、6.98％（3/43），所有43株菌株對氨芐西林和磺胺間甲基嘧啶則完全耐藥。多數(shù)菌株具有多重耐藥性，兩個與多重耐藥輸出泵相關的基因AHA-0858和aheABC在嗜水氣單胞菌各菌株中廣泛分布，檢出率分別為77％（33/43）和81％（35/43）。實驗中發(fā)現(xiàn)嗜水氣單胞菌的外膜蛋白電泳圖譜與細菌的耐藥性有一定的關系，外膜蛋白型

4、相同的菌株在耐藥性也基本一致。同其他菌株相比，菌株NB-1，A.Pun和MR-1于30kD～45kD處部分外膜蛋白條帶缺失，并且其對氟苯尼考（florfenicol）耐藥性也大幅增強，提示部分外膜蛋白的缺失可能與嗜水氣單胞菌的耐氟苯尼考有一定的關系。同時發(fā)現(xiàn)部分具有完全一致OMP型的菌株在某些抗生素的耐藥性上也存在差異，表明嗜水氣單胞菌的耐藥性有其他因素影響。
　　 為了對嗜水氣單胞菌的耐藥機理進行更進一步的研究，本實驗通過對嗜

5、水氣單胞菌J-1株（諾氟沙星敏感株）利用半數(shù)最小抑菌濃度的方法誘變形成穩(wěn)定的諾氟沙星耐藥株，出發(fā)菌株J-1對諾氟沙星的最小抑菌濃度為0.78μg/mL，誘變后形成的諾氟沙星耐藥菌株NJ-1最小抑菌濃度為90μg/mL。利用比較蛋白質組學的方法對嗜水氣單胞菌J-1和諾氟沙星耐藥誘變株NJ-1進行二維電泳的研究，軟件分析比較兩者的蛋白質電泳圖譜的差異蛋白點。通過雙向電泳，質譜測定肽質量指紋圖譜，鑒定出嗜水氣單胞菌外膜蛋白中4個與嗜水氣單胞菌