平菇菌種液氮保藏技術的優(yōu)化及保藏效果鑒定.pdf

1、食用菌菌種保藏方法眾多，其中液氮保藏是一種安全有效且能長期保藏菌種的方法。但是液氮保藏過程中的降溫方式、保護劑及解凍方式等環(huán)節(jié)都影響到菌種保藏效果。為了更好地保存食用菌種質資源，需要系統(tǒng)研究菌種液氮保藏過程中的各環(huán)節(jié)，并對保藏后的菌種進行保藏效果的鑒定，以期為菌種液氮保藏方法提供一定的理論依據(jù)和技術支持。
　　 本實驗選擇皖平菇1號和新平400的原種為實驗材料，設計降溫方式、保護劑及解凍方式三因素三水平的正交試驗，對高溫型和低溫

2、型的兩個平菇菌種的液氮保藏技術進行比較系統(tǒng)的研究，并鑒定菌種的液氮保藏效果，主要測定菌絲體生長指標、子實體形態(tài)學指標及產(chǎn)量、子實體粗蛋白以及可溶性糖含量、子實體酯酶同工酶譜和SRAP分子標記分析，通過以上指標鑒定其遺傳穩(wěn)定性，以期找到平菇菌種液氮保藏的適宜條件，也為其它菌種的液氮保藏提供一些有利的借鑒。主要結論如下：
　　 (1)液氮保藏對皖平菇1號和新平400菌絲體生長指標影響最小的處理均為不加保護劑直接將菌種放入液氮，38～

3、40℃水浴快速解凍的條件組合。保護劑和解凍方式是產(chǎn)生影響的兩個主要因素，降溫方式為次要因素；
　　 (2)液氮保藏對皖平菇1號子實體形態(tài)學指標、子實體產(chǎn)量產(chǎn)生影響最小的處理組合均為A1B1C3，保護劑為主要影響因素；對新平400以上各指標影響最小的處理均為A3B2C3，解凍方式為主要影響因素。
　　 (3)液氮保藏對皖平菇1號和新平400子實體可溶性蛋白和可溶性糖含量的影響不同。對皖平菇1號可溶性蛋白影響最小的處理為A1

4、B2C1，保護劑為主要影響因素，對可溶性糖影響最小的處理為A1B1C3，解凍方式為主要影響因素；對新平400子實體可溶性蛋白影響最小的處理為A3B1C1，降溫方式為主要影響因素，對可溶性糖影響最小的處理為A2B2C1，保護劑為主要影響因素。
　　 (4)液氮保藏對兩個菌株遺傳穩(wěn)定性沒有明顯影響，子實體酯酶同工酶譜產(chǎn)生少量差異，試驗所選兩個處理組合(皖平菇1號為A1B1C3和A3B3C2，新平400為A2B3C3和A1B1C2)的

5、子實體DNASRAP擴增產(chǎn)物經(jīng)電泳分析，部分引物出現(xiàn)少量特異性條帶，這可能是由于真菌本身變異性較大所致，也有可能是因為在液氮保藏的過程中，低溫環(huán)境導致了某些抗性基因的變化，這還有待于進一步探討。
　　 (5)液氮保藏后皖平菇1號酯酶同工酶譜平均每個處理出現(xiàn)2.9條不同的酶帶，新平400平均每個處理出現(xiàn)4.8條不同酶帶，SRAP分析皖平菇1號兩個處理共出現(xiàn)10條差異條帶，新平400共出現(xiàn)23條差異條帶。皖平菇1號兩個處理出現(xiàn)的特異