DNA不同片段在探討齒爪金龜屬系統(tǒng)發(fā)育中的研究.pdf

1、金龜甲為重要的農(nóng)林害蟲，也是重要的經(jīng)濟(jì)昆蟲，在國(guó)民生產(chǎn)生活中占有重要的地位。金龜甲的幼蟲稱作“蠐螬”，其中很多種類是農(nóng)作物、果樹林木、藥用植物的重要害蟲。鑒于其在國(guó)民生產(chǎn)生活中的重要意義，國(guó)內(nèi)外許多科學(xué)工作者都對(duì)其有研究。但目前對(duì)金龜甲的系統(tǒng)學(xué)研究還多停留在形態(tài)學(xué)的層次上，并對(duì)其分類系統(tǒng)意見不一。本研究從分子生物學(xué)的角度入手，以PCR和測(cè)序的實(shí)驗(yàn)方法，分析金龜甲線粒體DNA的Cytb、COI基因和核糖體rDNAITS1基因的序列特征，并

2、應(yīng)用分子生物學(xué)軟件對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行分析處理，建立分子系統(tǒng)進(jìn)化樹，以期得到研究齒爪金龜屬三亞屬之間的系統(tǒng)關(guān)系，并試圖確定分類地位。
　　 研究過程可分為以下三部分:基因組DNA的提取、mtDNA、ITS基因目的片段的擴(kuò)增、測(cè)序，及對(duì)序列結(jié)果的分析和研究。
　　 1.基因組DNA的提取及測(cè)序:所用標(biāo)本大部分為新鮮標(biāo)本和無水乙醇浸泡標(biāo)本，基因組提取方法采取傳統(tǒng)的平衡酚提取法，提取總DNA，以此擴(kuò)增線粒體基因Cytb基因的特異性片

3、段，將擴(kuò)增效果好的樣品進(jìn)行純化、測(cè)序(委托北京六和華大生物責(zé)任有限公司）
　　 2.同源性比較:使用Clustal.X1.8軟件進(jìn)行多重比對(duì)，采用精確慢比對(duì)，并將比對(duì)的序列保存為Clustal形式。
　　 3.構(gòu)建系統(tǒng)樹:使用MEGA4統(tǒng)計(jì)核苷酸四種堿基的使用頻率，計(jì)算遺傳距離和轉(zhuǎn)換值、顛換值及多態(tài)性位點(diǎn)?；贙imura雙參數(shù)模型。構(gòu)建NJ系統(tǒng)樹和MP樹。
　　 通過對(duì)結(jié)果的分析討論，得出如下結(jié)論:
　　

4、 1.對(duì)齒爪鰓金龜三亞屬線粒體Cytb基因和COI基因具有昆蟲線粒體所具有的高A+T含量，分別為69.1％與67.8％，堿基組成出現(xiàn)AT偏斜;核糖體ITS基因分A+T含量為43.2％，低于G+C含量。
　　 2.齒爪金龜屬三亞屬COI基因、Cytb基因與ITS基因中核苷酸的顛換高于替換。
　　 3.本研究應(yīng)用三種基因遺傳分子標(biāo)記，進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析，結(jié)果表明ITS基因?qū)傧挛锓N的系統(tǒng)分析更為適合。所得系統(tǒng)關(guān)系與傳統(tǒng)分類基