鴨源性IBVZZ2004株S1和M基因在sf9昆蟲(chóng)細(xì)胞中的表達(dá)及表達(dá)蛋白的抗原性研究.pdf

1、鴨源性IBVZZ2004是從以生長(zhǎng)和免疫抑制為主要癥狀的病鴨體中分離到的一株病毒，該毒株對(duì)雞和鴨都有致病性。本研究進(jìn)行了IBVZZ2004株S1和M基因在sf9昆蟲(chóng)細(xì)胞中的表達(dá)，并檢測(cè)了表達(dá)蛋白的抗原性，為進(jìn)一步研究這兩種蛋白的生物功能及基因工程疫苗奠定基礎(chǔ)。
　　 根據(jù)IBVZZ2004株病毒的全基因序列，對(duì)S1和M基因序列進(jìn)行分析，分別設(shè)計(jì)出S1和M基因的特異性引物；采用RT-PCR方法擴(kuò)增出S1和M基因，經(jīng)瓊脂糖電泳鑒定得

2、到大小約1.6kb和700bp的片段，與預(yù)期結(jié)果一致。
　　 用限制性?xún)?nèi)切酶分別對(duì)S1、M基因和轉(zhuǎn)移載體pFastBacHTA進(jìn)行雙酶切，酶切后分別回收，于16℃水浴鍋中連接過(guò)夜，將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞，構(gòu)建重組轉(zhuǎn)移載體。經(jīng)酶切、PCR和序列測(cè)定鑒定正確后，將重組轉(zhuǎn)移載體pFastBacHTA-S1和pFastBacHTA-M分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH10Bac感受態(tài)細(xì)胞，通過(guò)藍(lán)白斑法篩選出陽(yáng)性重組Bacmid，經(jīng)P

3、CR鑒定證明成功構(gòu)建了重組穿梭載體Bacmid-S1和Bacmid-M；將Bacmid-S1和Bacmid-M分別進(jìn)行3次純化培養(yǎng)后，再分別轉(zhuǎn)染處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的sf9昆蟲(chóng)細(xì)胞，收獲重組桿狀病毒及病變細(xì)胞，檢測(cè)S1和M基因的表達(dá)；經(jīng)SDS-PAGE和Western-blot檢測(cè)獲得大小約64kDa和31kDa的特異性蛋白條帶，免疫熒光檢測(cè)Bacmid-S1和Bacmid-M感染的細(xì)胞均有特異性熒光。研究結(jié)果表明鴨源性IBVZZ2004的S