牙鲆彈狀病毒非結構蛋白(NV)的表達及抗原性初步分析.pdf

1、牙鲆彈狀病毒（Hirame rhabdovirus，HRV）是彈狀病毒科粒外彈狀病毒屬新成員，具有強烈的致病性，給全球海水養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴重的經濟損失。病毒在入侵宿主細胞的過程中，宿主細胞通過模式識別受體(pattern recognition receptors，PRRs）監(jiān)測病原相關分子模式(pathogen associated molecular patterns，PAMPs）而感知病毒的入侵，并通過信號通路的級聯傳遞，協(xié)調病毒感

2、染早期宿主反應，并隨即激活宿主獲得性免疫反應。然而，通過和宿主的相互作用，RNA病毒進化出逃逸宿主 RLRs免疫監(jiān)視的不同策略來干擾宿主 RLRs抗病毒信號，阻斷 RLRs信號的傳導，從而導致宿主發(fā)病。多數情況下，病毒傾向于利用非結構蛋白進行此功能。而HRV致病機制及逃逸宿主免疫監(jiān)視的分子機制還沒有得到明確的闡述。
　　本研究根據GenBank中HRV中國株全長基因序列設計特異性引物，用RT-PCR方法從病毒懸液中分段擴增HRV全

3、長基因組序列，得到的基因序列拼接后，經BLAST比對發(fā)現與中國株的同源性達到99.77％，為后續(xù)獲得感染性克隆奠定基礎。
　　根據GenBank中HRV中國株非結構蛋白（Non-virion perotein，NV）基因序列設計特異性引物，用RT-PCR方法擴增NV基因，鑒定無誤后連接到大腸桿菌pColdⅠ載體中，構建的重組表達質粒pColdⅠ-NV在大腸桿菌BL21（T1?）宿主菌中獲得高效表達，表達產物以可溶性蛋白存在。經Ni