小尾寒羊脂聯(lián)素基因的克隆測(cè)序、結(jié)構(gòu)特征與表達(dá)分析.pdf

1、脂肪對(duì)于綿羊維持正常生命活動(dòng)及生理代謝發(fā)揮重要的作用，脂肪性狀是影響綿羊肌肉品質(zhì)的一個(gè)重要的經(jīng)濟(jì)性狀。脂聯(lián)素(Adipoq)是脂肪組織分泌的一種內(nèi)源性特異蛋白質(zhì)，也是一種重要的脂肪細(xì)胞因子。本試驗(yàn)克隆了小尾寒羊脂聯(lián)素基因的全長(zhǎng)cDNA序列，并對(duì)該基因及其所編碼的蛋白、mRNA水平和蛋白水平上的表達(dá)豐度進(jìn)行了分析。主要研究結(jié)果如下:
　　1.采用RT-PCR和RACE方法，以小尾寒羊組織為試驗(yàn)材料，克隆了小尾寒羊脂聯(lián)素基因的全長(zhǎng)cD

2、NA序列，獲得GenBank登錄號(hào)為KM216385。該基因cDNA全長(zhǎng)為2616 bp，包含720 bp的開(kāi)放閱讀框、76bp的5'非編碼區(qū)(5'UTR)和1820bp的3'非編碼區(qū)(3'UTR)。其中，開(kāi)放閱讀框編碼239個(gè)氨基酸。
　　2.生物信息學(xué)分析顯示，脂聯(lián)素基因編碼的蛋白分子量為26 kDa，等電點(diǎn)為5.88，并存在信號(hào)肽結(jié)構(gòu)，能被分泌到細(xì)胞外發(fā)揮作用。在氨基酸序列中，發(fā)現(xiàn)2個(gè)蘇氨酸、3個(gè)絲氨酸和3個(gè)酪氨酸殘基存在磷

3、酸化位點(diǎn)，并發(fā)現(xiàn)存在5個(gè)O-糖基化位點(diǎn)而無(wú)N-糖基化位點(diǎn)。與其他物種的氨基酸同源性分析，證明綿羊脂聯(lián)素蛋白的氨基酸序列與山羊的相似性最高。
　　3.檢測(cè)到Adipoq基因在小尾寒羊和杜泊羊中呈現(xiàn)出組織表達(dá)差異性。不同組織間，脂聯(lián)素基因在皮下脂肪、腎周脂肪、腹股溝脂肪、臂二頭肌、心血管組織中有表達(dá)，在肝臟、腎臟、卵巢組織中未檢測(cè)到表達(dá)，提示脂聯(lián)素基因的表達(dá)有一定的組織特異性。其中，該基因在三種脂肪組織中表達(dá)水平最高，極顯著高于其他組

4、織(P＜0.01)，但是三種脂肪組織之間的表達(dá)量無(wú)顯著差異(P＞0.05)。不同品種間，脂聯(lián)素基因在杜泊羊臂二頭肌組織中的表達(dá)極顯著高于小尾寒羊(P＜0.01)。
　　4.檢測(cè)到Adipoq蛋白在小尾寒羊和杜泊羊中存在組織表達(dá)差異性。不同組織間，脂聯(lián)素蛋白在皮下脂肪、腎周脂肪、腹股溝脂肪、臂二頭肌、心血管組織中有表達(dá)，在肝臟、腎臟組織中未檢測(cè)到表達(dá)。其中，脂聯(lián)素蛋白在三種脂肪組織中表達(dá)量最高，極顯著高于臂二頭肌和心血管(P＜0.0

5、1)，但是三種脂肪組織之間的表達(dá)量無(wú)顯著差異(P＞0.05);不同品種間，脂聯(lián)素蛋白在三種脂肪組織中的表達(dá)量，小尾寒羊均高于杜泊羊，但差異均不顯著(P＞0.05)。杜泊羊臂二頭肌的脂聯(lián)素蛋白表達(dá)量高于小尾寒羊，而心血管中脂聯(lián)素蛋白表達(dá)水平低于小尾寒羊，但是差異也不顯著(P＞0.05)。
　　綜上所述，本研究成功克隆了小尾寒羊脂聯(lián)素基因，對(duì)該基因序列及其編碼的氨基酸序列的結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行了預(yù)測(cè)，并比較分析了小尾寒羊和杜泊羊脂聯(lián)素基因mR