人脂聯(lián)素球狀結(jié)構(gòu)域（gAd）基因的克隆、表達(dá)、純化及活性的測(cè)定.pdf

1、山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文人脂聯(lián)素球狀結(jié)構(gòu)域（gAd）基因的克隆、表達(dá)、純化及活性的測(cè)定姓名：楊澤華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：解軍楊琦20050518山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文結(jié)果構(gòu)建了pBV220一gad質(zhì)粒表達(dá)載體，經(jīng)DNA測(cè)序鑒定序列的正確。SDS—PAGE電泳表明在大腸桿菌DH5a和JMl09中成功表達(dá)出gAd因子，在DH5a中表達(dá)量更高，表達(dá)量約占全菌蛋白的20％。經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)初步復(fù)性的gad蛋白因子

2、與對(duì)照組相比有降低血糖和游離脂肪酸的活性。同時(shí)構(gòu)建了pBV220一gad融合表達(dá)載體SDS—PAGE電泳和Western—blotting結(jié)果表明在大腸桿菌DH5a中成功表達(dá)出gad融合蛋白，用Ni2NTA樹脂柱純化后獲得gAd融合蛋白經(jīng)SDS—PAGE顯示單一條帶。結(jié)論應(yīng)用基因工程技術(shù)，成功構(gòu)建了pBV220一gad質(zhì)粒表達(dá)載體，表達(dá)出的gad因子具有降低血糖和游離脂肪酸的活性，同時(shí)構(gòu)建了pBV220一gad融合表達(dá)載體，獲得gAd融